Tipi di elettroforesi del Gel

Tipi di elettroforesi del Gel

Elettroforesi del gel è una tecnica di laboratorio che separa le molecole organiche mediante una corrente elettrica per disegnare molecole di diverse dimensioni attraverso i pori in una matrice di gel. Diverse molecole sono ordinate in base alla carica elettrica o formato della molecola; molecole che sono più brevi in lunghezza o superiore in carica netta si muovono ad un tasso più veloce verso l'elettrodo terminale. Queste molecole differenti vengono confrontate con frammenti di molecola di lunghezza nota. Applicazioni comuni di questo processo comprendono screening per malattie genetiche o disturbi e analisi delle impronte genetiche dell'embrione.

SDS-PAGE

Per elettroforesi molecole proteiche, è normalmente necessario denaturare loro in primo luogo perché strutture secondaria, terziaria e quaternaria di una proteina sono piegati e ripiegati rendendo questa tecnica Impossibile; la struttura primaria di una proteina è una catena polipeptidica dritto. SDS (sodio dodecil solfato) è un detergente che si dissolve i legami che danno proteine loro configurazioni piegate, e il solfato rende la catena caricati negativamente. PAGINA (elettroforesi del gel di poliacrilammide) è il processo mediante il quale i frammenti di queste proteine denaturate migrano verso l'elettrodo positivo attraverso la matrice di gel poliacrilammide. Le macchie vengono applicate ai frammenti della proteina per visualizzarli nel gel. Un problema con questo metodo è che separa solo frammenti di dimensioni, piuttosto che la sequenza dell'amminoacido; così è difficile determinare il tipo di proteina esatta utilizzando questo metodo.

Elettroforesi del Gel dell'agarosi

Molecole di DNA e RNA sono già dotati di una carica negativa come risultato il componente del gruppo fosfato organico dello loro scheletro zucchero-fosfato; questo fosfato è caricato negativamente fornendo una carica negativa netta all'intera molecola. Agarosio forma una matrice complessa attraverso il quale possono eseguire la migrazione di nucleotidi. Concentrazioni più elevate di agarosio in soluzione consentirà più facile separazione dei frammenti più piccoli, mentre l'inverso è vero per le più grandi molecole. Più piccole catene di genetiche migrano più lontano e più veloce di grandi catene; inoltre maggiore è la tensione utilizzata, più velocemente le molecole si muovono. Una macchia, spesso EtBr (bromuro di etidio), è usata per osservare le bande di frammento, che sono misurate contro noti frammenti di DNA. Uno svantaggio di questo metodo è che il gel ha il potenziale di fusione durante l'elettroforesi.

Meno comuni protocolli

Gel di sequenziamento vengono raggiunti da denaturare le molecole di DNA con il calore e l'utilizzo di un gel di poliacrilammide vicino la temperatura di denaturazione. Spesso i substrati contengono altri composti denaturante. Questo tipo di elettroforesi permette l'isolamento di sequenze di DNA che differiscono di meno come una coppia di basi. Elettrofocalizzazione gel permettono la separazione delle molecole della proteina senza denaturare le proteine migrano in base alla loro carica nativo. Ciò avviene versando intenzionalmente un gel con un gradiente di pH da un'estremità a altra. Come le proteine migrano perquisiscono un pH, aggiungendo o perdere ioni, che gli darà una carica neutra; qui si concentra, o bloccato.