Tecniche di verifica di colonna in HPLC

Tecniche di verifica di colonna in HPLC

Cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) è uno strumento prezioso per i moderni chimici organici perché consente loro non solo per separare una miscela nei suoi componenti, ma anche per quantificare quanto di ognuno è presente. Anche se i dispositivi HPLC sono strumenti sofisticati, loro prestazioni gradualmente possono deteriorarsi nel tempo. Affinché funzionino correttamente e fornire risultati affidabili, è importante verificare periodicamente le loro prestazioni.

Pressione e portata

La pompa deve essere in grado di mantenere i tassi di flusso preciso. Prova la portata è abbastanza semplice e comporta semplicemente misurando la quantità di tempo necessario per raccogliere una quantità arbitrariamente scelta di solvente dalla colonna alle impostazioni di tasso di flusso diverse. Pressione della pompa può essere testato collegando l'uscita della pompa con un dado di morti e un registratore per misurare la pressione della testa della pompa. La pressione dovrebbe aumentare rapidamente a circa 3.000 libbre per pollice quadrato (PSI), quindi aumentare più gradualmente ad una pressione superiore, al punto che la pompa si spegne automaticamente. Se la pressione fluttua a 3.000 PSI o diminuisce rapidamente dopo che la pompa si spegne, solitamente implica un malfunzionamento, come una perdita nel sistema.

Gradiente

La pompa deve anche essere in grado di variare con precisione la composizione della fase mobile o solvente, quindi medicati o vampate di calore dai composti colonna sempre più non polari come la percentuale del meno-polare solvente aumenta. Precisione gradiente viene testato utilizzando due canali alla volta, uno di loro fornendo solvente puro e l'altro un solvente con un tracciante disciolto chimico, come la caffeina. Man mano che aumenta la concentrazione della soluzione seconda, si può misurare l'assorbanza (UV) ultravioletto di colonna di output e utilizzare questi dati per verificare la precisione gradiente.

Modulo iniettore

Precisione del modulo iniettore può essere testato eseguendo sei iniezioni di replicare con un singolo campione; significative discrepanze nei risultati suggeriscono che avete un problema. Alcuni esperimenti riguardano volumi di iniezione variabile, quindi è anche importante testare le capacità di iniettore per disegnare la quantità appropriata di campione. Effettuando le iniezioni su tutta la gamma di 0-100 microlitri, un chimico può ottenere e plot di dati e determinare la correlazione tra i risultati e la concentrazione del campione. Una debole correlazione suggerisce un malfunzionamento.

Modulo rivelatore

L'assorbanza di record del modulo rivelatore per soluto e solvente di eluizione o che scorre dalla parte inferiore della colonna, così l'esattezza è particolarmente critico per garantire buoni risultati. Molti strumenti HPLC includono built-in lunghezza d'onda verifica consente di garantire la lunghezza d'onda che il rilevatore utilizza è identico a quello selezionato. Un altro test comporta l'uso di una serie di campioni che contengono una concentrazione crescente di un composto come la caffeina. Il chimico può quindi rappresentare graficamente i risultati contro la concentrazione della soluzione di prova e determinare la forza della correlazione. Una debole correlazione suggerisce un malfunzionamento.