Tecniche di analisi della placca

Tecniche di analisi della placca

Così come ci sono virus che infettano gli esseri umani, ci sono anche virus che infettano i batteri. Questi ultimi tipi sono chiamati batteriofago, dal greco per i mangiatori di batteri. Batteriofago hanno giocato un ruolo importantissimo nello sviluppo della biologia molecolare moderna e sono stati suggeriti anche a volte come un possibile modo per trattare le infezioni resistenti agli antibiotici. Il saggio della placca permette agli scienziati di isolare batteriofago e capire quanti sono presenti in un campione.

Brodo di coltura

Il primo passo nella preparazione di un saggio della placca è quello di far crescere una cultura batterica brodo - preferibilmente in fase iniziale di registro (una fase in cui i batteri stanno crescendo molto rapidamente). La concentrazione dei batteri nel brodo può essere determinata tramite spettrofotometria (sfolgorante di luce attraverso un campione e misura quanto è trasmesso), che permette agli scienziati di determinare la densità delle cellule batteriche nella cultura. Una volta pronto il brodo di coltura, è possibile preparare il dosaggio.

Piastra

Il saggio della placca utilizza una capsula di Petri con uno strato di agar duro. La piastra dovrebbe essere tenuta in calda nell'incubatrice fino a quando non utilizzato. Nel frattempo, un campione dei batteri sono mescolati con agar fuso, che è stato tenuto al caldo a 50 gradi. L'agar fuso è stata preparata con brodo di Luria o bisogno di un'altra miscela che fornisce i batteri di nutrienti per crescere. Una soluzione contenente il batteriofago viene diluita con brodo o soluzione fisiologica sterile e quindi aggiunto alla miscela fusa agar/batteri. Gli scienziati versare la miscela di agar fuso di Petri e scuoterla delicatamente intorno a disperdere l'agar e quindi attendere che l'agar indurire.

Incubazione

Appena l'agar si è indurita, la piastra possa essere incubata a temperatura calda così i batteri si svilupperanno tutta la piastra. Il fago replicare fuori controllo all'interno di cellule batteriche infetti, Apri queste cellule di scoppio o lisare li e quindi infettare altri batteri a sua volta. La crescita batterica crea un "prato" attraverso la piastra, che è punteggiata da chiari punti dove il fago hanno ucciso tutti i batteri. Queste macchie chiare sono chiamate placche.

Conteggio e considerazioni

È importante Incubare le piastre per la lunghezza appropriata del tempo. Troppo tempo permette le placche a crescere in dimensioni al punto dove si sovrappongono. Contando le placche che si formano, gli scienziati possono capire quanti dei fagi erano presenti nel campione originale. Essi possono anche isolare alcuni del fago che sono cresciuti da agar. Come sempre in microbiologia, è importante alla pratica di una tecnica sterile corretta in qualsiasi momento in tutto questo esperimento. Contaminare la cultura può rovinare l'esperimento.