Tecniche di estrazione dell'acido deossiribonucleico (DNA) dell'osso hanno un simile protocollo di estrazione del DNA, che in genere richiede la lisi dei campioni di cellule e tessuti. Perché osso possiede una superficie più impenetrabile, tuttavia, la maggior parte dei protocolli di estrazione richiedono polverizzazione. In alternativa, se non la polverizzazione è un metodo fattibile o preferito, nuova biotecnologia offre tubi che utilizzano la pressione per estrarre il DNA da piccoli frammenti ossei.
Di sterilizzazione
Come punto di inizio per qualsiasi tipo di estrazione del DNA, la sterilizzazione deve essere fatto per ridurre al minimo la contaminazione incrociata. Superfici dell'osso campioni devono essere trattati inizialmente con candeggina e acqua distillata. Inoltre, tutti gli strumenti devono essere sterilizzati in autoclave a temperature elevate. Per i più grandi strumenti (cioè Polverizzatori) che non possono essere sterilizzato nell'autoclave, candeggina e alcool dovrebbe essere utilizzati per pulire accuratamente le superfici con cui il campione può venire in contatto. Inoltre, il pipettaggio e manipolazione dei campioni dovrebbe essere fatto in una ben ventilata cappa di Plexiglas.
Metodo di polverizzazione
Una volta che l'osso campioni sono stati lavati con candeggina e acqua distillata, le superfici esterne devono essere levigate con uno strumento di piccolo disco. Questo processo rimuoverà la contaminazione di DNA straniera ed esporre qualche osso morbido tessuto necessario per l'estrazione. I campioni di osso quindi possono essere terra polvere finissima per estrazione. Per circa 750mg di polvere di osso, 1.6ml di buffer di digest è necessario. Secondo un metodo pubblicato in "Nucleic Acids Research", buffer di digest dovrebbe consistere di EDTA.1M, una soluzione salina e proteinasi K. Questo digest accese tutta la notte a 37 gradi C per permettere la digestione ottimale del tessuto osseo per estrazione del DNA.
Dopo la digestione durante la notte, i campioni devono essere centrifugati ad alta velocità per 15-30 minuti per consentire tutto il materiale inutile a pellet. Il supernatante è quindi rimosso e aggiunto a un acetato di ammonio, soluzione di etanolo puro e sale per precipitazione. Questa preparazione è fatta più facilmente in provette Eppendorf e poi messo in ghiaccio secco per precipitazione ottimale. Tubi, quindi, possono essere centrifugati dopo incubazione di un'ora circa in ghiaccio secco. Dopo che il precipitato è formato, rimuovere il surnatante (verificare attentamente per un pellet) e sciogliere il pellet in 20 a 50 microlitri di acqua deionizzata sterile.
Metodo non polverizzato
Una società di biotecnologia denominata pressione BioSciences Inc ha creato un nuovo metodo per l'estrazione del DNA che non richiede nessuna polverizzazione di osso. Il metodo utilizza pressione ciclismo tecnologia (PCT) per estrarre il DNA. Questa tecnologia viene rivendicata per eliminare contaminazioni che si verifica spesso l'utilizzo di un polverizzatore. Simile al metodo polverizzato, tuttavia, i campioni dell'osso ancora devono essere sterilizzati in candeggina e acqua distillata prima della preparazione e martellato in frammenti più piccoli di circa 250 mg al fine di inserire nei tubi di impulso del kit.