Scopo del Gel di macchia di DNA in un laboratorio di elettroforesi

Scopo del Gel di macchia di DNA in un laboratorio di elettroforesi

Quando si esegue il DNA su gel di agarosio in un laboratorio, il gel è incolore e trasparente come una lastra di jello chiaro, e a meno che non si macchia, non sarai in grado di vedere il tuo DNA. Coloranti speciali come il bromuro di etidio rendono visibili le bande di DNA, così si levano in piedi contro lo sfondo, e la posizione delle bande consente di analizzare i risultati.

Coloranti

Bromuro di etidio è il colorante più comune per la colorazione del gel di elettroforesi di DNA. Si inserisce tra i due capi delle molecole di DNA nel campione. Purtroppo, si può scivolare tra le ciocche non solo nel vostro campione ma nelle vostre cellule pure, quindi deve essere maneggiato con cura; indossando guanti doppi è consuetudine per precauzione. Anni recenti hanno visto l'introduzione di prodotti chimici alternativi quali SYBR Safe.

Fluorescenza

Dopo aver aggiunto il colorante, esso verrà associato al DNA nel campione, facendolo diventare altamente fluorescente. Posizionare il gel sotto una luce nera e le bande di DNA si illumina brillantemente, distinguendosi in vivido contrasto allo sfondo. Il colorante permette di vedere le bande di DNA sul gel, che altrimenti sarebbe invisibile all'utente. È essenziale che si astenesse da guardare o in luce nera durante la visualizzazione del gel, perché il UV potrebbe gravemente danneggiare gli occhi.

Analisi

Tecnici di laboratorio in genere fotografare il gel con una fotocamera digitale; a quel punto possono scartare il gel e salvare l'immagine su un disco rigido a rivedere in seguito. Si può ricavare un sacco di informazioni dalla posizione e tipi di bande che si vede. Se è stato eseguito il marcatore sul gel oltre il campione, per esempio, è possibile ottenere una stima approssimativa delle dimensioni di molecole di DNA e il numero di coppie di basi che contengono.

Altre caratteristiche

Se hai utilizzato un tipo speciale di proteina per tagliare un pezzo di DNA, è possibile eseguire su un gel e controllo per bande multiple nella stessa corsia per assicurarsi che l'enzima di restrizione ha funzionato. In alternativa, se si lavora con piccoli anelli di DNA chiamato plasmidi, e si desidera assicurarsi che un plasmide contiene un segmento che inserito in esso, si potrebbe tagliare con una speciale proteina ed eseguirlo su un gel per assicurarsi che il segmento era presente.