Risoluzione dei problemi di elettroforesi del Gel del DNA

Elettroforesi del gel è usato nella biologia e può essere utilizzato per separare le molecole di DNA in base alle dimensioni. Un vassoio di gel con il buffering di soluzione è collegato ad una corrente elettrica che attrae le molecole di acido nucleico del DNA. Più brevi molecole viaggiano più velocemente di quelli più lunghi nel gel. Una volta completo l'elettroforesi, si dovrebbe essere in grado di visualizzare un modello di bande sul gel che possono essere analizzati e utilizzati come dati. Tuttavia, ci sono casi in cui i risultati non vanno come previsto, ma per fortuna, ci sono soluzioni facili per ogni tipo di problema.

Istruzioni

• Completare il processo di elettroforesi del gel del DNA. Se dopo 30-45 minuti non ci sono nessun risultati utilizzabili, preparatevi a risolvere il tuo esperimento.

• Se le bande sono molto deboli o inesistenti, è probabile che vi sia un problema con il campione di DNA. Provare ad aumentare la quantità di DNA utilizzato, evitando contaminazione nucleasi e assicurarsi di utilizzare il buffer corretto per impedire che il DNA diventando denaturato. C'è anche una possibilità che il DNA è stato eseguito fuori il gel, quindi cercate di elettroforesi per un breve lasso di tempo o abbassare la tensione.

• Spalmato fasce del DNA possono anche indicare problemi con il DNA. Essere consapevoli della contaminazione nucleasi, corretto buffering condizioni, quantità di sale presente e la presenza di proteine in eccesso per impedire che il DNA venga degradata o denaturato. Troppo DNA sul gel può anche creare bande spalmati, quindi cercate di diminuire la quantità utilizzata.

• A volte è possibile notare che mancano alcune bande dai risultati. Se mancano gruppi minori, essi possono avere spinto fuori il gel. Provare a utilizzare una tensione inferiore o diminuire il tempo. Se le bande più grandi sono mancanti, c'è una possibilità che i componenti non sono separati completamente ancora. Questo può facilmente essere risolto aumentando il tempo di elettroforesi.

• Incoerenti letture indicano problemi con il processo di elettroforesi. Verificare che la temperatura del gel e tensione sono appropriati. Inoltre, sempre utilizzare una quantità sufficiente di soluzione tampone.

Consigli & Avvertenze

  • Essere paziente, anche se è necessario eseguire l'elettroforesi un paio di volte. Tenere presente che diversi tipi di gel hanno proprietà differenti. Verifica per informazioni dettagliate sul tuo tipo di gel prima dell'esperimento.
  • Assicurarsi di utilizzare la fonte elettrica con cautela.