La colonna di una macchina di alte prestazioni cromatografia liquida (HPLC) è la fase stazionaria del processo di estrazione. Il liquido--in genere una soluzione tampone..--che scorre continuamente sopra la colonna è la fase mobile. Come sostanze chimiche vengono iniettati in HPLC che scorrono con la fase mobile sopra la colonna ed eluire alle diverse e specifiche volte a produrre un cromatogramma. L'altezza delle cime sul cromatogramma ti dice la quantità della sostanza chimica nel campione analizzato. Problemi di colonna causano scarsi risultati, quindi risoluzione dei problemi è importante.
Istruzioni
• Avviare l'HPLC e lasciarlo equilibrare per la quantità di tempo che è lo standard nel vostro protocollo di laboratorio. Nel frattempo, compongono delle norme analitiche utilizzate il vostro HPLC (varia a seconda di quello che analizza il tuo laboratorio e HPLC). Una volta che la macchina ha equilibrato, iniettare standard sulla macchina..--questo sarà sia fatto a mano utilizzando una siringa o caricando campionatrice automatica della vostra macchina.
• Guardate il cromatogramma prodotto dallo standard. Questo è il vostro migliore indicazione per problemi di colonna. La seguente procedura determinerà problemi comuni di colonna trovati da questo cromatogramma.
• Controllare il tempo di eluizione, il tempo che necessario per il picco standard a comparire. I risultati possono variare per i diversi prodotti chimici, ma il tuo laboratorio dovrebbe avere un "caso migliore scenario" tempo per un picco a comparire. Se il picco si presenta molto presto, questo indica che si sta rompendo il materiale all'interno della colonna e la colonna deve essere sostituito. Se il picco è molto lontano fuori che può indicare che la colonna non è stato preparato bene. In questo caso, la colonna può essere utilizzata ancora se il picco è ancora abbastanza buono per le esigenze del vostro laboratorio (più il tempo di eluizione, più piccolo il picco sarà).
• Esaminare la forma del picco. Idealmente, si desidera un picco che aumenta rapidamente e ha una forma simmetrica. Un picco di ampia "collina-like" indica il materiale nella colonna sta rompendo giù come fa un picco che "tails"..--ha una pendenza più lungo ad una estremità rispetto agli altri. In entrambi i casi, la colonna può ancora essere utilizzata se i risultati sono abbastanza buoni per le vostre esigenze. Per prolungare la durata della colonna sarà in grado di "Capovolgere" (rimuovendo la colonna e trasformandolo a scorrere nella direzione opposta). Questo può imballare nuovamente il materiale all'interno, ma non sempre funziona.
• Esaminare la linea di base (le linee che conducono al vostro picco). Se la linea non è liscia, questo è definito "rumore" nella linea di base. Rumore forte, frastagliato è probabile elettrici, ma casuale rumore "accidentato" può indicare la colonna dispone di contaminanti. Se si tenta di eseguire fase mobile fresco sopra la colonna per pulirlo. Se è ancora rumoroso, seguire il protocollo di laboratorio per ricondizionare la colonna. Se è ancora rumoroso sarà necessario sostituire la colonna. Un po' di rumore può essere tollerata, purché non interferisca con le letture.
Consigli & Avvertenze
- Risoluzione dei problemi di HPLC, ci vuole pazienza. Provare una cosa alla volta per risolvere problemi e offrire il tempo sufficiente di macchina equilibrare tra i tentativi.
- Mantenere puliti la fase mobile e siringa per iniezione. Non toccare l'ago della siringa con le mani o è possibile introdurre gli oli della pelle nella colonna.
- Utilizzare i protocolli di sicurezza di laboratorio standard quando si lavora su HPLC.