Elettroforesi del gel è usata in laboratorio al fine di separare le proteine o acidi nucleici da altro. L'elettroforesi utilizzando poliacrilammide invece dell'agarosi è usato più spesso per le proteine per determinare le masse molecolari dei polipeptidi della proteina.
Preparazione del gel dell'agarosi
Un gel di poliacrilammide è preparato con slot in esso. Il gel è formato da una soluzione calda poliacrilammide liquido di versamento in una scatola poco profonda. La casella deve contenere una struttura del comblike con denti che puntano verso il basso nella soluzione. Il poliacrilammide diventa un gel presto dopo esso è stato versato e il pettine viene rimosso per rivelare fori rettangolari.
Sodio dodecil solfato (SDS)
La proteina è trattata con sodio dodecil solfato (SDS) per denaturare le subunità di una proteina di grandi dimensioni, così ognuno può essere misurato separatamente. I vantaggi di questo sono che la SDS dà i polipeptidi una carica negativa così essi migreranno verso l'estremità negativa, o anodo, del gel. In secondo luogo, la SDS assicura che tutte le subunità avrà la stessa carica e quindi tutti migreranno nel gel secondo loro masse molecolari invece di spese.
Aggiunta della proteina
Una piccola quantità di DNA o proteine viene inserita in uno dei fori rettangolari ad una estremità del gel. Una corrente elettrica viene eseguita attraverso il gel a pH neutro. Circa 10 microlitri di una scaletta di DNA così come i due controlli vengono caricati anche in gel. La scaletta del DNA viene utilizzata per consentire la misura di quanto il campione si trasferì nel processo di elettroforesi.
Elettroforesi
La macchina è quindi ha acceso a 100 volt e lasciare per 30 minuti. Dopo i campioni sono stati electrophoresed per 30 minuti, il gel con un vassoio sono rimossi e posizionati in un vassoio di colorazione per circa tre minuti. Ciò allora è seguita da disponendo il gel in acqua calda per cinque minuti. Il gel è ora pronto per essere posizionato sulla casella di luce al fine di osservare il movimento dei frammenti del DNA.
Altre considerazioni
Quando si Visualizza il gel sotto la luce, alcune cose importanti dovrebbero essere presi in considerazione. Una cella può essere eterozigoti o omozigoti per il gene a seconda che la copia sia presente o non è presente in entrambe le copie o in uno solo. Il risultato eterozigotico può apparire come una singola banda perché i segmenti di DNA che sono amplificati in modo più efficiente appaiono più scuri nel gel. Un colorante viene aggiunto anche così ogni polipeptide può essere visto sia durante che dopo l'elettroforesi.