Protocolli di lisi delle cellule di mammifero

Protocolli di lisi delle cellule di mammifero

Lisi delle cellule sono la rottura aperta delle cellule, mentre causando il minor danno le proteine, organelli, DNA ed altre macromolecole come possibile. Lisi delle cellule sono usato per un certo numero di tecniche di biologia cellulare e molecolare, tra cui il Western blotting, analisi delle proteine, Southern blotting e studio della sequenza del DNA. La molecola o organello sotto studio determinerà il metodo utilizzato per lisare le cellule.

Meccanica

Ci sono un numero di metodi meccanici per lisare cellule frullatore, ultrasuono e omogeneizzatori. Questo metodo si basa su lame per macinare e spostare i tessuti e le cellule. Spesso viene utilizzato per le celle che sono difficili da lisare, quali microrganismi. Tuttavia, tessuti complessi, quali malattie epatiche o renali, possono richiedere la lisi meccanica. Lisi meccanica si traduce spesso in una soluzione viscosa che è difficile da chiarire. Il calore generato può denaturare le proteine di interesse.

Buffer

Detergenti spesso vengono utilizzati per lisare le cellule di mammiferi. Questo metodo è più mite interrompendo le membrane delle cellule. Il detersivo selezionato dipenderà da quello che le cellule che hanno bisogno di essere lisati e tecniche il lysate delle cellule deve essere utilizzato per. Le cellule e buffer spesso sono tenute freddo se si stanno studiando le proteine per prevenire la loro denaturazione. Altre considerazioni sono il pH e la concentrazione di sale e se gli inibitori sono necessari per prevenire la denaturazione delle proteine.

Congelare il disgelo

Le cellule possono essere congelate e scongelate e, oltre un certo numero di cicli, la cella verrà lyse. Questo metodo induce la cellula a gonfiarsi e la forma di cristalli di ghiaccio, che causa la membrana cellulare rompere e rilasciare il contenuto della cella. Uno studio condotto da Haifeng Yu e colleghi per Bio-Rad, nel 2006, ha mostrato che l'aggiunta di un ciclo di gelo-disgelo con sonicazione, in tipi di cellule di mammifero, migliorata la sensibilità per alcune proteine rispetto al solo sonicazione.

Omogeneizzazione liquido

Le cellule sono costretti attraverso spazi ristretti, che rompe la membrana cellulare. Un numero di diversi tipi di omogeneizzatori è disponibile, anche se l'apparecchiatura può essere costoso. Il numero di volte in cui le cellule devono passare attraverso dipende le cellule e le attrezzature utilizzate. Rendimento, tuttavia, può essere variabile.