Metodo di elettroforesi del DNA

Priorità bassa

Elettroforesi del gel è una tecnica che gli scienziati usano per esaminare frammenti di DNA separandoli seconda le dimensioni del frammento. Metodi di elettroforesi del DNA hanno applicazioni attraverso un certo numero di settori scientifici. Profilo del DNA è usato dagli scienziati forensi nelle indagini penali. E può anche essere impiegato per verificare condizioni genetiche o per stabilire la paternità. Biologi nel campo di conservazione impiegano elettroforesi del DNA per stabilire attentamente come organismi sono legati, che è particolarmente utile nei programmi di riproduzione in cattività, dove problemi di inbreeding sono una costante minaccia. È anche impiegato da biologi evolutivi nel loro esame delle relazioni tra le specie.

Il Gel

Il metodo di elettroforesi di DNA comincia con il versamento del gel dell'agarosi. Agarosio in polvere, un estratto fatto da alga simile a gelatina, è combinato con un tampone di elettroforesi. Uno dei più comuni tipi di buffer è Tris-Borato-EDTA (TBE). La miscela è sottoposto a calore, fino a quando non si scioglie e quindi è lasciato raffreddare brevemente e inserito in un cassetto del pezzo fuso dove solidificherà. La miscela viene preparata in modo tale che le depressioni, chiamate pozzetti dei campioni, sono lasciate nel gel. Lo scopo della miscela gel è di fornire un mezzo per il DNA di viaggiare attraverso che fornisce anche la resistenza.

Corrente

Il cassetto del pezzo fuso è collocato in una camera di elettroforesi. Campioni di DNA, in una soluzione tampone di loro, vengono caricati nei pozzetti. In questo frangente, corrente verrà passato attraverso il gel. Tuttavia, è importante garantire che l'elettrodo negativo è posizionata sull'estremità dove si trovano i pozzi di campione nella camera. Il DNA è carico negativamente e viaggerà verso l'elettrodo positivo, che dovrebbe essere all'estremita ' del vassoio. Una volta che la corrente è accesa, il tentativo di frammenti di DNA di viaggiare verso l'elettrodo positivo. Il gel fornisce resistenza al DNA frammenti e i frammenti più piccoli viaggerà più velocemente di quelle più grandi.

Esame

Valutare i progressi del DNA può essere realizzato in tre modi. Coloranti di monitoraggio può essere utilizzato, con blu di bromofenolo e xilene cianolo coloranti comunemente impiegati per questo scopo. Un metodo alternativo consiste nell'utilizzare il bromuro di etidio, un agente di colorazione fluorescente. Questo può essere aggiunto al gel prima del processo di elettroforesi. Ma può anche essere utilizzato per macchiare il post-elettroforesi attraverso immersione in una soluzione diluita di bromuro di etidio. Se il bromuro di etidio è aggiunto prima o dopo, è esaminato in un transilluminatore UV.


POTREBBE PIACERTI ANCHE