Metodi di purificazione degli enzimi

Enzimi, gruppi di proteine, sono comunemente isolati dai campioni di tessuto e purificati per uso sperimentale. I metodi sperimentali possono consentire la comprensione della funzione delle cellule e vie metaboliche. Cromatografia e altri metodi insieme regolato alle condizioni di pH, concentrazione salina, ecc., sono scelti basati sui tipi di enzimi essere purificati.

Precipitazione

Il primo metodo di purificazione di enzima è usando la tecnica di precipitazione basata sulla concentrazione di sale. Solfato dell'ammonio è una soluzione comune utilizzata in questo metodo. Solitamente la soluzione di proteine/enzimi è portata a una saturazione del 50 per cento con una soluzione di solfato di ammonio saturo. Dovuto l'equilibrio di sale, le proteine si coagulano e precipitano verso il basso quando centrifugato ad alta velocità per circa 15 minuti.

Cromatografia

Metodi di cromatografia includono scambio ionico, bio-affinità e idrofobicità. Scambio ionico utilizza carica molecolare e bio-affinità utilizza l'interazione biomolecolare. Preparazione iniziale per tali metodi include la lisi delle cellule e centrifugazione per un surnatante puro. I surnatanti contengono gli enzimi appropriati isolati e possono essere ulteriormente purificati da uno di questi metodi di cromatografia.

Gel filtrazione

Gel filtrazione è anche un metodo di cromatografia sulla base del peso molecolare del campione enzima desiderato. Il metodo utilizza perline che sono disponibili in varie dimensioni dei pori. I pori di queste perle, che le proteine appropriate che sono destinate a essere filtrati. Una volta che tutto il un campione viene eseguito, le perle sono estratte per enzimi purificati.