Biologi spesso bisogno di purificare proteine da campioni di tessuto o componenti specifici delle cellule come parte di un esperimento. Il processo mediante il quale si separano le cellule nei loro componenti è chiamato il frazionamento delle cellule. Ci sono diversi passaggi di questo processo
Omogeneizzazione
In primo luogo le cellule devono essere rotto aperte. Una varietà di metodi differenti sono disponibili; il metodo scelto dipende dal tipo di esperimento e il tipo di campione (campione coltura batterica o tessuti di mammiferi, per esempio) detergenti come SDS o Triton X perturbare la membrana cellulare, così il contenuto può fluire fuori. Sottoporre le cellule a onde ad ultrasuoni o sonicating li anche loro romperà aperto, come volontà di agitazione in presenza di perline di metallo o vetro. Frullatori possono lavorare con campioni di tessuto, ma non funzionerà con i batteri o altri microrganismi.
Filtrazione
Le cellule sono sempre omogeneizzate in una soluzione tamponata, che aiuta a stabilizzare il pH e quindi evitare danni al contenuto della cella durante l'estrazione. Occasionalmente l'omogenato risultante deve essere filtrata per rimuovere tessuto connettivo o altri elementi indesiderati. A seconda della natura del contaminante, questo può essere semplice come versando l'omogenato attraverso una garza e raccogliere il filtrato sul lato opposto. A tutti volte seguenti omogeneizzazione, l'omogenato dovrebbe essere tenuto freddo per ridurre al minimo l'attività delle proteasi, enzimi che tagliare le proteine. A volte gli inibitori della proteasi sono aggiunti pure.
Centrifugazione
Successivamente, l'omogeneizzato è trasferito in una provetta per centrifuga e collocato in una centrifuga. Questo dispositivo contiene un rotore che gira ad altissima velocità, lanciando il contenuto di ogni centrifuga verso l'esterno..--in modo molto simile che guida sinistra intorno a una curva a gomito si lancia verso la porta lato passeggero. Componenti ad alta densità del sedimento omogeneato prima e a velocità inferiori a densità inferiore dei componenti, quindi i componenti dell'omogenato possono essere separati e raccolti sulla base della densità.
Precipitazione del solfato di ammonio
A volte i biologi necessario raccogliere organelli specifici dall'omogeneizzato per ulteriore studio. Se è così, useranno ripetute centrifugazione per isolare la frazione contenente l'organello che hanno bisogno. Se, d'altra parte, stanno cercando di isolare una specifica proteina, possono utilizzare una tecnica chiamata precipitazione del solfato di ammonio. Con l'aggiunta di sale solfato di ammonio, aumentano la forza ionica della soluzione, causando alcune proteine a precipitare dopo centrifugazione. Questo processo riduce la concentrazione di proteina nell'omogeneato e renderà più facile per purificare la proteina di interesse più tardi.