Validazione del metodo è necessario per portare un'idea di metodo HPLC in una procedura operativa standard. In genere questo utilizza una grande quantità di tentativi ed errori e richiede molto tempo. Validazione del metodo è possibile utilizzare programmi per computer per ottimizzare la procedura di metodo e accelerare il processo di validazione del metodo. HPLC sta per cromatografia liquida ad alte prestazioni e viene utilizzato per separare e identificare elementi e composti chimici diversi.
Linearità
Linearità è per concentrazioni chimiche con un intervallo specificato. Linee di regressione sono usati per determinare la concentrazione di analita contro i risultati dell'analisi HPLC. Quando la concentrazione dell'analita è raddoppiata e poi raddoppiata ancora una volta, la relazione lineare dovrebbe produrre una buona misura per una linea. Se non c'è nessuna buona linearità, quindi il metodo non è affidabile e non è possibile determinare la relazione tra uno sconosciuto e lo standard utilizzato in HPLC.
Precisione e accuratezza
Al momento della convalida del metodo, gli stessi risultati devono essere raggiunto quando lo stesso campione viene eseguito attraverso l'HPLC. Se i risultati ottenuti non sono coerenti ogni volta, il metodo non è affidabile. Maggior parte dei metodi mostrerà la basato sulla deviazione standard relativa di ripetibilità. È anche importante per l'analisi quantitativa che le concentrazioni del composto da misurare sono accurate rispetto ad un campione noto.
Limite di rilevazione
Il limite di rilevazione si riferisce alla concentrazione minima che può essere rilevata dalla macchina HPLC o dal metodo. Questo limite di rilevazione è confermato mediante l'esecuzione di molti campioni tramite HPLC quando il rapporto segnale-rumore del prodotto chimico e della linea di base è di due a uno. È possibile migliorare il limite di rilevamento o essere in grado di analizzare la concentrazione più bassa riducendo il rumore del rivelatore e migliorando il segnale dell'analita. Utilizzare lunghezze d'onda specifiche, aumentare la massa o il volume degli analiti o colonne ad alta efficienza al fine di migliorare il segnale dell'analita.
Robustezza
La robustezza è relativo alla riproducibilità quando si esegue lo stesso campione utilizzando diverse condizioni. Pertanto il metodo dovrebbe funzionare quando si utilizza diversi strumenti HPLC, quando l'esecuzione del metodo in giorni diversi, facendo nuovi reagenti, facendo nuove miscele di analita e avere un laboratorio diverso eseguire il metodo. Un metodo molto buono può essere eseguito su tutte le condizioni senza grandi differenze nei risultati. I risultati tra tutte le diverse condizioni di prova sarà lo stesso quando si esegue gli stessi campioni.