I metodi di tipizzazione HLA

I metodi di tipizzazione HLA

Il complesso di istocompatibilità, o MHC, comprende un gruppo di geni che codificano per le proteine che presentano frammenti di proteine sulla superficie delle cellule per il riconoscimento di cellule bianche del sangue. In esseri umani, il MHC è chiamato HLA, o antigene umano del leucocita. Il sistema immunitario utilizza le proteine HLA per distinguere "sé" da "altruistici"..--le proprie cellule degli invasori. Quando si eseguono procedure quali trapianti di midollo osseo, le differenze di HLAs tra due individui possono causare problemi come Graft - versus - host disease, dove le cellule di T dal donatore attaccano le cellule del paziente. Digitando specifici geni HLA del donatore e confrontandoli con geni HLA specifici nel destinatario può contribuire a garantire una buona partita.

Classificazione secondo il sierotipo

Metodi di classificazione secondo il sierotipo utilizzano anticorpi per distinguere tra diverse varianti di una data proteina HLA. Ogni anticorpo è altamente specifico per una data molecola. Utilizzando anticorpi differenti, gli scienziati possono dividere HLAs in diversi sierotipi di"" e determinare se donatore e paziente per alcuni sierotipi che HLAs sono una buona partita. Questo metodo ora è stato in gran parte soppiantato da nuovi metodi basati sul DNA, che sono più precisi e spesso più facile da condurre.

PCR

Una strategia per la tipizzazione HLA si basa su una tecnica di biologia molecolare comune chiamata PCR, o reazione a catena della polimerasi. Fondamentalmente, PCR rende numerose copie di un tratto di DNA; la regione che è stata copiata o "amplificato" è specificato da due brevi pezzi di DNA chiamato primer. Per fare la tipizzazione HLA, tecnici di laboratorio possono utilizzare primer che funziona solo per alcune versioni di un dato gene HLA ma non altri. Eseguendo la reazione di PCR con alcuni primer, tecnici possono determinare quali varianti sono presenti nel paziente e il potenziale donatore.

Macchiarsi del sud

Un altro metodo basato sul DNA-è molto simile a una tecnica di biologia molecolare chiamata Southern blotting. In primo luogo, PCR è usato per amplificare geni HLA specifici. Successivamente, i prodotti della reazione di PCR sono separati da dimensione e trasferiti ad una membrana. La membrana è trattata con un piccolo pezzo di DNA chiamato una sonda; Questa sonda è stata etichettata con un isotopo radioattivo o "radioattive". La sonda sarà solo legare al DNA sulla membrana se una sequenza corrispondente (cioè complementare) è presente. Testando la membrana con diverse sonde di DNA, il tecnico può determinare che le varianti di un dato gene HLA sono presenti.

Sequenziamento del gene

Il metodo più preciso e accurato per la tipizzazione HLA è direttamente sequenziamento dei geni HLA da donatore e paziente e confrontando le sequenze. Storicamente questo sarebbe stato praticamente impossibile dato il costo elevato e sfide tecniche coinvolte; negli ultimi anni, tuttavia, il costo è notevolmente diminuito, e per alcuni laboratori sequenziamento del gene ora può essere una valida opzione. Il suo vantaggio principale risiede nella sua capacità di distinguere tutte le diverse varianti di un dato gene HLA.