Gli anticorpi sono proteine immuni chiamati immunoglobuline che sono prodotte in risposta al rilevamento di un oggetto estraneo o antigene, come batteri, virus o cellule tumorali. Ci sono cinque tipi principali di immunoglobuline nel corpo: IgA, IgG, IgM, IgE e IgD. Livelli per ogni tipo di anticorpo sono misurati per testare e trattare per cancro o altre malattie infettive. Ci sono diversi tipi di metodi utilizzati per misurare gli anticorpi per ricercatore o esigenze mediche.
Analisi enzima-collegata dell'immunosorbente
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) è utilizzato per determinare la quantità di anticorpo o la quantità di proteina legata all'anticorpo in un campione di sangue. Il test utilizza l'interazione antigene-anticorpo, dove l'antigene ed anticorpo formano complessi. L'antigene o anticorpo nel campione sono etichettati con un enzima. Dopo l'antigene ed anticorpo formare complessi sono in grado di essere rilevata su una piastra ELISA. L'enzima del complesso reagisce con un substrato per formare un prodotto colorato che può essere contato su un contatore di piastra al fine di determinare la quantità di anticorpi presenti nel campione.
Western Blot
La tecnica di Western Blot viene utilizzata per determinare il peso molecolare degli anticorpi sia la quantità relativa di anticorpi presenti in un campione. Tecniche di Western blot utilizzano elettroforesi del gel per separare gli anticorpi. Gli anticorpi sono trasferiti a un foglio di nitrocellulosa e incubati con proteine generici. Una soluzione contenente gli enzimi è aggiunto legarsi agli anticorpi specifici. Viene aggiunto il substrato e gli anticorpi vengono incubati per convertire i complessi anticorpo/enzima in un prodotto colorato che può essere visto e fotografato al fine di determinare la quantità di anticorpi presenti.
Citometria a flusso di fluorescenza
Citometria a flusso di fluorescenza è una tecnica che è in grado di contare gli anticorpi attraverso la misurazione delle proprietà cellulari e fluorescente di anticorpi. Un laser passa attraverso le cellule e le misurazioni sono determinate attraverso i cambiamenti nella dispersione della luce, luce assorbimento ed emissione di luce, che passa attraverso rivelatori nel campione. Le conseguenti variazioni di luce vengono trasferite a un programma e manipolate in segnali digitali che vengono visualizzati in un grafico al fine di ottenere i conteggi delle cellule specifiche per i diversi tipi di cellule, come gli anticorpi.
Emocitometro
I conteggi delle cellule sugli anticorpi possono essere eseguiti utilizzando un emocitometro. Una soluzione di campione di sangue viene preparata in una provetta Eppendorf utilizzando una pipetta. Trypan blu soluzione viene aggiunto alla soluzione per segnare eventuali cellule morte e la miscela di aggiunto all'emocitometro. L'emocitometro contiene linee della griglia in cui i conteggi delle cellule sono realizzati con un riscontro di mano, visualizzazione della griglia le linee meno di 10 X power di un microscopio composto.