Una macchina di chromotography liquido ad alte prestazioni (HPLC) analizza campioni di laboratorio iniettando il campione nella macchina. Come il continuo fluire fase mobile (o fase movimento) soluzione della trasporta HPLC il campione sopra la colonna HPLC, le molecole del campione diventa separato basato su dimensioni e polarità. Le singole molecole uscire la colonna e causano una carica elettrica di varia intensità, a seconda della concentrazione della molecola. Un computer collegato all'HPLC legge la carica elettrica. Questo si presenta sul monitor come un picco. La collezione dei picchi del campione viene chiamata un cromatogramma. Per utilizzare un HPLC Agilent efficacemente, è necessario sapere come risolvere i problemi.
Istruzioni
Problemi di pressione
• Controllare la pressione della pompa HPLC. La pressione varierà a seconda della configurazione HPLC del vostro laboratorio, e si dovrebbe sapere qual è il range di normalità. Se la pressione è superiore o inferiore rispetto al normale, questo indica un problema.
• Controllare la pompa HPLC per perdite se la pressione è bassa. Perdite si verificano a qualsiasi connettore e non potrebbero essere ovviamente grondante. Verifica per accumulo di sali nei dintorni di qualsiasi connettore. Questo è un segno di una perdita lenta. Stringere eventuali raccordi o sostituire usurati raccordi per porre rimedio a problemi di pressione bassa.
• Girare la pompa a pressione zero e rimuovere la colonna, se si verificano problemi di pressione alta. Con la colonna fuori, girare la macchina indietro fino alla portata di riposo (il tasso di flusso si lascia la macchina al pernottamento quando non in uso). Se c'è ancora pressione senza la colonna, lavare la pompa con un mix 50/50 acetonitrile/acqua fino a quando la pressione scende. Se la pressione rimane a zero senza la colonna associata, ripristinare o sostituire la colonna per il protocollo di laboratorio.
Problemi di rumore
• Accendere il computer per il tuo HPLC ed eseguire il programma che produce il tuo cromatogrammi. Se la linea di base del cromatogramma è rumoroso (non liscia) senza iniettare qualsiasi campioni in HPLC, è uno causato da fase mobile sporco o interferenze elettriche. Fare nuova fase mobile secondo il protocollo di laboratorio. Sempre utilizzare acqua di grado HPLC per la fase mobile e filtrare bene la fase mobile. Il rivelatore della tua HPLC deve essere tenere sempre chiuso.
• Iniettare il tuo standard preparati in HPLC. Se c'è rumore solo quando un campione viene iniettato, controllare che non si sta iniettando eventuali bolle d'aria in HPLC. Risultato in cime frastagliate, grande rumore delle bolle di aria. Se si è certi che non sono iniettando bolle d'aria, il problema è probabilmente una soluzione immonda usata per fare lo standard. Rifare la soluzione in cui si diluire il tuo standard, allora il rimpasto lo standard.
• Guarda la linea di base per il rumore che viene visualizzato in un ciclo regolare. Questo è normalmente causato da una bolla d'aria all'interno del sistema. Spegnere la pompa per zero pressione, rimuovere la colonna, utilizzare la funzione di eliminazione per forzare la bolla fuori. Ricollegare la colonna e girare la pompa torna alla sua pressione di accensione. Evitare le bolle d'aria mantenendo la fase mobile a temperatura costante e la fase mobile secondo il protocollo di laboratorio di degassamento.
• Verifica la previsione per il rumore costante. Se la linea di base indica una serie di rumore costante e frastagliato, piuttosto che una linea retta, aggiorna il tuo elettrodi. A seconda del modello di Agilent HPLC si dispone, può variare la configurazione dell'elettrodo e la manutenzione. Seguire il protocollo di laboratorio per pulizia, lucidatura e riempimento elettrodi di tuo HPLC.
Problemi di picco
• Iniettare il preparato standard in HPLC. Se il picco di campione non è simmetrico, o se si divide il picco (un picco appare come due), la colonna di materiale di imballaggio è logoro o diventano separata. Aggiornare o sostituire la colonna per ogni protocollo di laboratorio.
• Iniettare il preparato standard. Se il cromatogramma Mostra picchi che sono più piccoli del normale, avete un problema di sensibilità o i tuoi standard sono vecchi. Rifare le norme ed eseguirli nuovamente. Se i picchi sono ancora piccoli, aumentare la sensibilità del HPLC per ottenere una punta più grande. Una diminuzione nella sensibilità nel corso del tempo è normale e indica che è necessario acquistare nuovi elettrodi nel prossimo futuro. Cambiando gli ingredienti della fase mobile e sostituire regolarmente le guarnizioni della pompa anche contribuire ad aumentare la sensibilità.
• Iniettare un preparato standard in HPLC. Se i picchi sono più ampi rispetto al normale, significa che avete bisogno ricondizionare la colonna per Reimballare la colonna materiale di imballaggio. Inoltre, verificare che si esegue la pompa HPLC alla portata corretta, poiché la bassa pressione causerà picchi stendere.
Consigli & Avvertenze
- Provare una cosa alla volta per correggere il vostro HPLC. Ogni "correzione" richiede la macchina per riequilibrare prima si può vedere se lo ha aiutato. Manutenzione HPLC richiede pazienza.
- Sempre conservare parti extra di HPLC, come foche e colonne, per manutenzione HPLC.
- Girare la pompa per zero pressione ogni volta che si rimuove la colonna dalla pompa. Una diminuzione improvvisa della pressione può distruggere le guarnizioni della pompa.
- Prima di rimuovere gli elettrodi, spegnere l'alimentazione di HPLC per evitare scosse.