Soluzioni tampone resistere alle variazioni di pH perché contengono deboli acido-base coniugati che neutralizzano ioni H + e OH. Soluzioni tampone sono costituiti da acidi deboli o basi e il sale di questo acido o base. Selezione di un sistema di buffer appropriato dipende l'intervallo di pH per il buffer. La maggior parte delle reazioni biologiche si verificano a un intervallo di pH di 6-8. Tampone di buffer fosfato sopra la gamma di pH di 6.5-7.5. Acido carbossilico buffer sono utili da pH 3 a 6. Borato buffer funzione da pH 8,5 a 10. Buffer di aminoacidi come glicina e istidina eseguire su una diversità di intervalli di pH. Tampone Tris è uno dei sistemi tampone più comunemente usato nei laboratori di biologia. I calcoli per una soluzione di tampone Tris verranno utilizzati nell'esempio seguente, ma la metodologia si applica a qualsiasi soluzione tampone.
Istruzioni
• Utilizzare il prodotto della molarità della soluzione finale e del volume per determinare le moli di base necessarie. Ad esempio, se 2 litri di soluzione 0,1 M di tampone Tris è necessaria, quindi il numero di moli di Tris necessaria è:
0.1 moli/litro x talpe 2 litri = 0,2 Tris base
• Calcolare la massa del buffer richiesto moltiplicando il numero di moli necessarie dal peso molecolare della base. Ad esempio, la massa di 0,2 moli di Tris base equivale a:
0,2 talpe Tris x 121,1 g/mole Tris = 24,22 g Tris
• Misurare la massa adatta di base su una scala.
• Sciogliere la base in acqua distillata utilizzando un ancoretta magnetica e mescolando la piastra calda. Scioglierli in un volume di acqua solo leggermente meno rispetto al volume di soluzione finale (950 a 975 mL per ogni litro di soluzione finale). Il pH del tampone Tris cambia con concentrazione e ha bisogno di riaggiustamento se troppo piccolo un volume iniziale viene utilizzato. Inoltre si consiglia di preparare il buffer alla stessa temperatura verrà utilizzato durante il test o sperimentare come Tris ha grande temperatura dipendente cambiamenti nel pH.
• Titolare la soluzione acquosa di Tris con acido cloridrico 1 M utilizzando un pH-metro.
• Portare la soluzione a volume finale con acqua distillata in un matraccio tarato.
Consigli & Avvertenze
- Per risparmiare tempo quando si prepara una soluzione tampone, è possibile utilizzare buffer premade concentrati presso il pH richiesto e diluire per molarità desiderata e volume. Preparare la soluzione tampone alla stessa temperatura che verrà utilizzato per evitare variazioni di pH significativa. Evitare regolazioni di pH che richiede tempo, titolare solo previa diluizione fino alla concentrazione desiderata. Dissoluzione in un volume troppo piccolo porterà a titolazioni ripetute.
- Prestare attenzione quando si maneggia acidi e basi. Indossare occhiali protettivi.