Il DNA è un ingrediente necessario in qualsiasi laboratorio dove il fuoco di studio è trascrizione genetica o proteina perché è dal DNA che i geni sono trascritti. Quando il DNA è Estratto da batteri o da mammiferi, a volte i risultati danno un rendimento basso. Quando la concentrazione del DNA è troppo bassa nella soluzione finale prodotta dall'estrazione, è inefficace in ulteriori esperimenti e deve essere liofilizzata e ricostituito per aumentare la sua concentrazione. La ricostituzione comporta l'aggiunta di acqua. Evaporazione del DNA senza contaminarlo richiede più attenzione ed è il punto chiave nel successo aumenti di concentrazione di DNA.
Ci sono due metodi comuni soluzioni di DNA di evaporazione. Evaporazione in un tubo richiede l'aggiunta di un sale per creare un pellet di DNA, ma è meglio per plasmidi a DNA o piccoli segmenti perché essi non coagula molto. Evaporazione su una bacchetta di vetro funziona meglio per il DNA di genomic dai campioni dei mammiferi perché questo DNA è spesso più spesso e possa essere prelevato con cura con un ottuso strumento.
Istruzioni
Metodo di asta di vetro
• Doppio del volume della soluzione del DNA con l'aggiunta di etanolo al 100%, pari al volume della soluzione del DNA.
• Tuffo la bacchetta di vetro con attenzione nella soluzione di DNA genomica mescolare lentamente. Evitare la miscela di emulsionanti. Il DNA è contenuto nell'interfaccia tra l'etanolo e la soluzione di DNA originale.
• Girare l'asta delicatamente tra un pollice e l'indice per il DNA attorno alla barra di torsione.
• Rimuovere l'asta. All'estremità di esso dovrebbe essere qualcosa che appare chiaro e viscoso. Che è il DNA.
• Posare l'asta attraverso una seconda bacchetta di vetro in modo perpendicolare, quindi non tocchi la tabella.
• Coprire il DNA sull'asta per proteggerlo mentre si asciuga.
Metodo di sale
• Aggiungere il 10% del volume totale di soluzione di DNA di soluzione di cloruro di sodio per aggregare il DNA.
• Spostare delicatamente a scatti la provetta con l'indice per miscelare la soluzione di DNA con il sale.
• Triplicare il volume totale della soluzione con l'aggiunta di etanolo al 100%. A questo punto, il DNA è spesso chiaramente visto con l'occhio nudo.
• Rotazione verso il basso il DNA nel tubo utilizzando una centrifuga su velocità massima per 30 secondi.
• Scartare il surnatante.
• Aggiungere un volume della soluzione di DNA originale di etanolo al 70% per lavare via il sale. Scartare il risciacquo di etanolo, preservando il pellet. Se la pallina diventa sloggiata dalla parte inferiore del tubo, girarla nuovamente nella centrifuga a tutta velocità per 30 secondi.
• Ripetere il passaggio 6 altre due volte.
• Asciugare il tubo permettendogli di sedersi sul lato dove non essere disturbato.