Le macchie nordiche sono principalmente uno strumento nella ricerca di RNA (acido ribonucleico). il RNA viene estratta dall'esemplare e correre su un gel per elettroforesi che viene poi trasferito ad una membrana filtro. Il tipo di RNA che viene utilizzato in Northern blot è mRNA (RNA messaggero), il prodotto della trascrizione del DNA.
Interpretazione dei risultati del Northern blot include incubando la macchia e lavaggio per rimuovere qualsiasi sonda non associati al fine di visualizzare la sonda associata.
Istruzioni
• Trasferire il filo del mRNA dal gel alla membrana. Incubare il filo con una soluzione di sonda omologa al mRNA che si utilizza. La sonda contiene un indicatore del vostro RNA di interesse per visualizzare più tardi. Se le coppie di basi della sonda sono complementari, la sonda verrà collegato al tuo mRNA.
• Lavare il filo del mRNA con RNAsi gratuito alta e bassa stringenza wash buffer per rimuovere qualsiasi sonda non associati.
• Cercare una band che si forma. Se si forma una band, che indica che il mRNA è omologa alla sonda. Se nessuna forma di banda, che indica che non è omologa. Questi risultati indicano in quale tipo di cellule o tessuti vostro RNA di interesse è il più abbondante.