Procedure di chimica e biochimica dipendono spesso reazioni eseguite a pH specifico. Tali reazioni beneficiano dell'uso di una soluzione tampone, che è un composto quantificato dalla sua resistenza alle variazioni di pH quando sia forti acidi o basi vengono aggiunti ad esso. Esecuzione di queste procedure richiede una comprensione delle soluzioni tampone così come i misuratori di pH di calibrazione e utilizzo di miscelazione.
Istruzioni
• Soluzione tampone selezionare sali con il contorno di pH corretto per la reazione. Reazioni e singole proteine hanno pH specifici requisiti. I requisiti sono esplicitamente dichiarati nel protocollo reazione, descritte nella documentazione che accompagna il campione della proteina/o registrate in tali volumi di riferimento come il manuale di chimica e fisica. PH di una soluzione di tampone ottimale dovrebbe cadere più vicino possibile all'unità di pH di reazione, non dovrebbe mai superare più o meno 1 valore di pH. Sali di soluzione tampone sono disponibili come pacchetto o possono essere miscelati da componenti grezzi seguendo ricette ampiamente disponibili.
• Versare la soluzione tampone in un becher da 1 litro. Aggiungere 1 litro di acqua distillata. Inserire una barra di agitazione nel becher e porre il becher su un vassoio di agitazione. Attivare la piastra di agitazione a un'impostazione medio-basse. Mescolare fino a quando nessun cristalli di soluzione tampone rimangono visibile.
• Becher da mL 100 posto sotto il pH-metro di test dell'ago. Pulire l'ago spruzzando con acqua distillata. Il becher si cattura la corsa fuori. Tarare il pH-metro utilizzando le soluzioni di taratura. Pulire l'ago nuovo. Smaltire il contenuto di deflusso catturato nel becher 100 millilitro.
• Portare il pH-metro per la piastra di agitazione e becher da 1 litro. Introdurre l'ago test nella soluzione tampone. Spingere il pulsante di calcolo di pH-metro per determinare il pH della soluzione. Se questo valore è troppo alto o basso, la soluzione richiede i seguenti passaggi aggiuntivi.
• Posizionare una punta fresca micropipetta sulla micropipetter. Attivare la piastra di agitazione a bassa velocità. Se il pH è troppo alto, è possibile utilizzare il micropipetter per aggiungere una goccia alla volta di acido cloridrico per la soluzione. Consentire la piastra di agitazione a mescolare la soluzione e misurare il pH. Ripetere il processo fino a quando il pH della soluzione è il valore necessario. Se il pH è troppo basso, ripetere questo passaggio con idrossido di sodio invece di acido cloridrico.
Consigli & Avvertenze
- Utilizzare sempre attrezzature pulite per evitare l'introduzione di batteri o altri agenti contaminanti nella soluzione.
- Le reazioni spesso richiedono un pH preciso. Anche una leggera deviazione può causare un esperimento fallito.