SDS-PAGE elettroforesi dodecilica del gel del solfato-poliacrilammide di sodio l'acronimo ed è una tecnica scientifica che consente di separare le proteine dal loro peso molecolare su un gel attraverso l'applicazione di una corrente elettrica. La tecnica permette l'identificazione di proteine sconosciute e la quantificazione delle proteine. Il poliacrilammide agisce come un mezzo attraverso il quale le proteine migrano e sono visualizzate. Rendendo il proprio gel di SDS-PAGE per l'elettroforesi è una procedura abbastanza semplice e richiede solo di base laboratorio esperienza.
Istruzioni
• Lavarsi le mani e mettere i guanti in lattice. Crea il tuo mix master di gel di risoluzione mescolando 400 ml di acqua, 250 ml 1,5 M Tris pH 8,8 e 10 ml 10% SDS.
• Creare il vostro gel di risoluzione. Mescolare insieme 1,98 ml di acrilammide 30 per cento, 3,96 ml di risoluzione dei gel mix master, 60 μl di 10 percentuale APS e 2,4 μl di TEMED. Questo renderà 6 ml di gel di risoluzione.
• Incastrano i piatti di plastica in modo da allinearli perfettamente. Clip sul fondo ed entrambi i lati delle piastre con clip di plastica. Versare il gel di risoluzione tra le piastre con la pipetta. Aggiungere poche gocce di etanolo in cima il gel di risoluzione con la pipetta. Lasciare che il gel indurire di polimerizzazione per 30 minuti.
• Rimuovere l'etanolo dalla parte superiore del gel di risoluzione versando delicatamente fuori in un lavandino. Sciacquare la parte superiore del gel con acqua deionizzata e versarlo fuori. Inserire con cura un tovagliolo di carta tra le lastre di plastica per assorbire l'acqua in eccesso da sopra il gel di risoluzione.
• Creare il tuo mix master di gel di impilamento combinando 340 ml di acqua, 62,5 ml 1,0 M Tris pH 6.8 e 5 ml 10% SDS.
• Mescolare 0,5 ml di acrilammide 30 per cento, 2,51 ml di stacking gel mix master, 30 μl di 10 percentuale APS e 3 µ l di TEMED fare tuo stacking gel mix. Pipettare 2 ml di gel d'impilamento in cima il gel di risoluzione, tra i piatti di plastica. Inserire il pettine del gel di SDS-PAGE tra le lastre di plastica. Lasciare che il gel ad asciugare per 10-15 minuti. Rimuovere con cautela il pettine del gel di SDS-PAGE e dimenando avanti e indietro e tirando fino e verso l'esterno.