Come fare il Gel di amido per elettroforesi

Per analizzare il DNA attraverso elettroforesi, è necessario innanzitutto preparare il gel. Come suggerisce il nome, il gel è fatto da una miscela di un amido chiamato agarosio, venduto solitamente sotto forma di polvere. Mai mescolare il gel con acqua pura..--è sempre necessario utilizzare buffer, altrimenti avrete problemi quando si tenta di eseguire il gel. La procedura seguente è inteso per le camere di elettroforesi delle dimensioni in genere trovato nell'insegnamento laboratori; Se l'unità è più grande o più piccola, regolare la quantità di ogni prodotto chimico come appropriato.

Istruzioni

• Mescolare con 350 ml di soluzione di tampone TAE X 1. Poiché lo stock originale è di 10 X, è necessario misurare 35 ml di brodo X 10 quindi aggiungere 315 ml di H2O deionizzata (dH2O) e ricciolo delicatamente per mescolare. È necessario soltanto 50 ml effettivamente fare l'agarosio del gel; il buffer rimanente verrà utilizzato nel vano di elettroforesi.

• Versare 50 ml della soluzione tampone X 1 il matraccio di Erlenmeyer. Misurare 0,5 g di agarosio e aggiungerlo al pallone, quindi mescolare.

• Un Kimwipe di roba in bocca del pallone e metterlo nel forno a microonde. Riscaldare per 1 minuto. NON lasciarlo incustodito..--Spegnere il forno a microonde, una volta che la soluzione nel pallone cominci a bollire. Se si surriscalda la soluzione, sarà il forno a microonde di spruzzi e fare un pasticcio che richiede tempo.

• Utilizzando una pipetta Pasteur, giaceva una linea sottile di gel lungo il luogo dove i deflettori nella camera di elettroforesi toccano il letto di gel. Posizionate il pettine sopra il letto di gel in modo che i denti a faccia in giù verso il letto. Regolare la profondità dei denti utilizzando le viti di pettine fino a quando sono appena sopra il fondo del piatto. NON si deve toccare la piastra.

• Lasciare raffreddare il gel a circa 60 gradi Celsius..--a quel punto il pallone sarà ancora caldo al tatto. Aggiungere il colorante (ad es., il bromuro di etidio o SYBR-cassetta di sicurezza) come indicato dal protocollo.

• Versare il letto di gel di agarosio e lasciarlo raffreddare fino a quando non si solidifica.


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