Una reazione a catena della polimerasi (PCR) viene utilizzata per creare milioni di copie di una sequenza di acido desossiribonucleico (DNA). Questa tecnica è utilizzata in medicina legale per replicare le piccole quantità di DNA trovato nei campioni biologici alle scene del crimine in modo da avere una quantità sufficiente di analizzare per prove. È inoltre ampiamente usato in biologia molecolare e biotecnologia ricerca per generare grandi quantità di un campione per gli esperimenti. Per avviare il processo di replica, è necessario brevi sequenze di DNA chiamato primer che si attaccano alla più lunga sequenza di DNA da replicare. A volte, i primer allegare uno a altro, piuttosto che alla sequenza di DNA, formando dimeri che inibiscono il processo di replica di destinazione.
Istruzioni
• Progettare il primer in modo che non sono auto-complementare a se stessi o di ogni altro, specialmente all'estremità 3'. Questo significa evitare sequenze di nucleotidi nel vostro disegno di primer che tendono a ibridare con altre sequenze all'interno il primer.
• Mantenere la guanina e citosina (G + C) concentrazioni nel vostro iniettore tra 40 e 60 per cento. G e C hanno una maggiore propensione per ibridare con a vicenda e quindi aumentare le probabilità di dimerizzazione.
• Utilizzare un enzima polimerasi "hot start" per la PCR. Un enzima di avvio a caldo è attivo solo quando la temperatura della vostra reazione è stata a 95 gradi Celsius per 10-12 minuti, a differenza di una normale polimerasi che è attivo a temperature più basse. L'avviamento a caldo consente di sequenza di DNA a snaturare completamente prima che l'enzima diventi attivo, riducendo al minimo la formazione di dimeri dell'iniettore che può verificarsi a temperature più basse con una normale polimerasi di destinazione.
• Esecuzione del test di condotta per la PCR dove è variare le concentrazioni di vostri iniettori per trovare la concentrazione più bassa alla quale la vostra reazione avrà successo. Le concentrazioni basse primer riducono la probabilità di ottenere dimeri dell'iniettore.