Nel 1980, Frederick Sanger ha vinto il suo secondo premio Nobel per lo sviluppo di un metodo per sintetizzare pezzi di DNA e terminare il filo ogni volta che appare una certa base di DNA. Questo ha permesso ai ricercatori di determinare la sequenza di basi di un filamento di DNA e fu usata per sequenziare il genoma umano di progetto genoma umano. Attuali metodi includono Polony, Solexa e ioni di semi-conduttori di sequenziamento. Tuttavia, il metodo di Sanger è ancora ampiamente usato e, a causa della sua relativa semplicità, è un buon esempio di come funziona il sequenziamento del DNA.
Istruzioni
• Impostare quattro bicchieri con quattro miscele di reazione. Aggiungere a ciascun becher il DNA da sequenziare, DNA polimerasi e una fornitura di nucleotidi A, C, G e T.
• Aggiungere una variante di una delle quattro variabili terminazione catena fluorescente-con l'etichetta di ogni nucleotidi, in modo che ogni bicchiere ha una variabile diversa terminazione con un'etichetta fluorescente diversa.
• Combinare il contenuto di tutte le provette di reazione quattro in un becher. Eseguire le reazioni su un gel di elettroforesi. Dedurre la sequenza di DNA leggendo l'immagine risultante dal più piccolo al più grande pezzo. Identificano le diverse etichette fluorescenti quali nucleotide basi corrisponde a ogni pezzo creando un insieme distintivo di bande dell'immagine di elettroforesi.
• Leggi la base di sequenza del filo del DNA mediante l'assegnazione di una base per ciascuna delle bande create dal nucleotide basi sull'immagine elettroforesi.