Accurato studio di genetica delle piante richiede coerenza nel materiale vegetale. Se la pianta siete interessati a questi cambiamenti a causa di ibridazione o muore fuori a causa di una malattia o una scarsa cura, tuoi esperimenti devono essere avviato nuovamente su una linea di piante diverse..--a meno che non si ha un campione congelato pianta pronto a scongelare e crescere. Quasi ogni pianta può sviluppare variazioni genetiche nelle piante della figlia. Un esemplare congelato del materiale vegetale assicura il successo di laboratorio in genetica vegetale.
Istruzioni
• Cellule vegetali di cultura in MS medium + 6% mannitolo in un matraccio di Erlenmeyer.
• Pianta raccolto cellule mentre si avvicina la fase esponenziale di crescita. Per molte linee cellulari, questo sarà circa quattro giorni dopo l'inoculazione.
• Aggiungere una parte 1M DMSO e glicerolo 1M una parte 1 parte 2M saccarosio a 3 parti MS Media e raffreddare la miscela sul ghiaccio. Questo è il mezzo di crioprotettore.
• Doppio del volume delle cellule aggiungendo lo stesso volume di crioprotettore medio al pallone.
• Agitare la miscela su un agitatore per un'ora e mezza.
• Lasciare riposare per 15 minuti dopo la miscelazione il pallone.
• Aliquotare le cellule nella parte inferiore del pallone nel congelatore 2 mL di tubi. Cercare di ottenere le aliquote di densità alta delle cellule.
• Lasciare raffreddare le provette in frigo per un'ora.
• Congelare le provette a-20 gradi C per 1 ora.
• Conservare le aliquote congelate di cellule vegetali in mezzo crioprotettore a-80 gradi C.
Consigli & Avvertenze
- Preparare il crioprotettore nello stesso giorno che si inizia la coltura delle cellule vegetali, così tutto è pronto per il giorno che si blocca la linea cellulare.
- Evitare ripetuti di congelamento-scongelamento passi perché questo distrugge le cellule e rende la cultura meno probabilità di essere ricresciuti.
- Ricordarsi di etichettare le provette e tenere un registro di che cosa è memorizzare nel congelatore. Potrebbe essere molto tempo prima di accedere nuovamente.