In biologia, elettroforesi del gel è uno dei modi più semplici per separare e analizzare il DNA, RNA o proteine. Il campione da analizzare è spesso preparato prima di eseguire l'elettroforesi. Il gel più comune utilizzato per DNA o RNA è agarosio, mentre l'elettroforesi della proteina utilizza spesso i gel di poliacrilammide. Al completamento dell'esperimento, avrete i dati che vi darà i dati molecolari per il campione da testare. Determinazione delle dimensioni molecolari del DNA è uno dei motivi più comuni per l'esecuzione di questo esperimento.
Istruzioni
• Su una superficie piana, posizionare il vassoio con il gel disposto orizzontalmente nella camera di elettroforesi. Versate il buffer di elettroforesi del gel fino a coprire completamente. Quindi, utilizzare una pipetta per caricare il primo pozzo con colorante blu di bromofenolo. Lane questo wells' sarà noto come il vicolo di marcatore.
• Mescolare il campione con il tampone di caricamento. Assicurarsi che la miscela è relativamente spessa per garantire che il campione si scende fino al fondo della soluzione tampone del gel. Utilizzando una pipetta, mettere una piccola goccia nel resto dei pozzi sul gel.
• Mettere il coperchio sulla camera e accendere la sorgente di alimentazione. Piccole bolle nella soluzione tampone devono essere visibile per indicare un flusso di corrente adeguato.
• Permettere alla corrente di eseguire fino a quando il colorante nella corsia marcatore è circa 2 cm dal bordo del gel e quindi spegnere la sorgente di alimentazione.
• Immergere il gel in etidio bromuro per circa 8 minuti. Quindi, esaminare i risultati in una sorgente di luce ultravioletta. È possibile utilizzare la distanza delle bande per eseguire calcoli relativi a pesi molecolari o altri tali informazioni che si desidera trovare.
Consigli & Avvertenze
- Essere sicuri di prestare attenzione alla posizione della banda del marker per prevenire l'elettroforesi da succedendo troppo a lungo e rovinando i risultati. C'è una possibilità che potrebbe essere necessario eseguire lo stesso esperimento alcune volte per ottenere i risultati desiderati. Non lasciate che questo frustrarlo come spesso capita a tutti.
- Il bromuro di etidio è molto cancerogeno. Essere molto attenti nel maneggiare questo prodotto chimico e non toccare mai con le mani nude.