Quando la purificazione di proteine, è necessario essere in grado di calcolare la loro concentrazione. Ci sono una varietà di modi per farlo, tra cui il test di biureto, l'analisi di Lowry, il dosaggio BCA e l'analisi di Bradford, che presentano vantaggi e svantaggi. Alla fine, tuttavia, tutti forniscono essenzialmente le stesse informazioni: capacità di assorbimento di un campione diluito contro assorbanza alla stessa lunghezza d'onda per le soluzioni di concentrazione standard. Quando si dispone di questi dati, è possibile utilizzare per calcolare la concentrazione di proteina.
Istruzioni
• Accedi al tuo foglio di calcolo e immettere i dati per gli standard in un nuovo foglio di calcolo. Mettere "molarità" delle proteine nella soluzione standard in una colonna e "assorbanza" alla lunghezza d'onda che è utilizzato in un altro.
• Rappresentare graficamente i dati standard ed etichettare il tuo grafico. Assicurarsi di molarità è sull'asse x e l'assorbanza è sul y.
• Utilizzando la regressione lineare o strumenti da riga di tendenza nel vostro programma di foglio di calcolo, trovare una retta di regressione per i dati. Se necessario, consultare il manuale utente del vostro programma di foglio di calcolo per le istruzioni.
• Prendere l'assorbanza per la concentrazione sconosciuta soluzioni proteiche e li innestare l'equazione derivata dal tuo programma di foglio di calcolo. È possibile utilizzare il programma di foglio di calcolo per fare i calcoli per voi se sarà utile.
Esempio: Se il vostro programma di foglio di calcolo derivato l'equazione y = 0,5 x + 0,4, dove y è assorbanza e x è molarità, si può risolvere questa equazione per x riorganizzando come segue:
(y - 0,4) / 0,5 = x
quindi collegare a vostra misura di assorbanza per y come segue:
(0,5 - 0,4) / 0,5 = x
0,1 /. 5 = 0,2 moli per litro
Consigli & Avvertenze
- Si noti che la concentrazione nella proteina viene generalmente calcolata in termini di microgrammi per microliter anziché moli per litro, anche se è possibile utilizzare molarità invece, se si preferisce.