Assorbimento si riferisce alla riduzione dell'intensità della luce quando passa attraverso la soluzione di una sostanza. Uno strumento chiamato uno spettrofotometro consente di misurare sperimentalmente assorbimento della soluzione collocata in una provetta. La legge di Beer-Lambert determina la relazione tra la concentrazione e l'assorbimento, espressa come assorbimento = (coefficiente di estinzione molare) (lunghezza del percorso) (concentrazione). Il coefficiente di estinzione molare è una caratteristica di una sostanza - una proteina, per esempio - che indica quanto il composto assorbe la luce. La lunghezza del percorso è la larghezza della provetta.
Istruzioni
• Dividere il valore di assorbimento per la lunghezza del percorso. Una cuvetta standard ha la lunghezza di percorso, o la larghezza di 1 centimetro (cm). Ad esempio, se l'assorbimento è di 0,24, quindi 0,24/1 = 0,24.
• Dividere il valore ottenuto nel passaggio precedente per il coefficiente di estinzione molare per calcolare la concentrazione molare di un composto. Ad esempio, se il coefficiente di estinzione molare è 480, la concentrazione è 0,24/480 = 0.0005 mole per litro (L).
• Moltiplicare la concentrazione molare per la massa molecolare del composto per calcolare la concentrazione in unità di grammo/L. Ad esempio, se il composto ha la massa molecolare di 750 g/mole, quindi 0,0005 mole/L * 750 g/mole = 0,375 g/L.
Consigli & Avvertenze
- Coefficienti di estinzione molare per molte sostanze (tra cui proteine) sono tabulati e si possono trovare facilmente online.
- Per le proteine, questo parametro può anche essere calcolato sulla base la sequenza aminoacidica della proteina utilizzando gli strumenti online.