Macchia occidentale, una tecnica analitica utilizzata per individuare una proteina specifica in un dato campione, impiega la capacità di un enzima o un anticorpo marcato con fluorescenza primaria di associare al suo antigene specifico. È un inizio di processo in tre fasi con elettroforesi su gel, seguita da membrana macchiare e sondando con anticorpi. Rilevazione della proteina può essere diretta o indiretta, con quest'ultimo usando un anticorpo secondario marcato diretto contro il primario. Anche se accettato come una tecnica di analisi di routine della proteina, macchia occidentale ha limitazioni così come i benefici.
Vantaggio: sensibilità
Uno degli argomenti più grandi a favore di macchia occidentale è la sua sensibilità. A causa della sua capacità di rilevare appena 0,1 nanogrammi di proteina in un campione, la tecnica teoricamente può servire come un efficace strumento diagnostico precoce, anche la minima risposta immunogenica da virus o batteri in un campione di rilevamento. Un'indiretta macchia occidentale ulteriormente si basa su questa sensibilità dalla capacità di anticorpo secondario per amplificare l'intensità del segnale rilevato dal sistema di imaging. Una maggiore sensibilità significa che meno anticorpi sono necessari per il test, che si riduce significativamente i costi di laboratorio.
Vantaggio: specificità
La tecnica della macchia occidentale deve la sua specificità per due grandi fattori che contribuiscono. In primo luogo, l'elettroforesi del gel Ordina un campione nelle proteine di diverse dimensioni, carica e conformazione. Questo processo in sé è un passo enorme verso la rilevazione, come band formata nel gel già dare indizi circa il formato della proteina o del polipeptide di interesse. La specificità dell'interazione antigene-anticorpo serve come il secondo fattore di grande. Poiché gli anticorpi specifici mostrano affinità per le proteine specifiche, il processo può rilevare selettivamente una proteina bersaglio anche in una miscela di 300.000 proteine differenti.
Svantaggio: Incline alla falsificazione o soggettiva risultati
Nonostante la sua sensibilità e specificità, un western blot può ancora produrre risultati errati. Un falso positivo si verifica quando un anticorpo reagisce con una proteina non conforme, che è ciò che spesso accade quando un paziente in fase di test per l'HIV succede di avere la tubercolosi o un numero di infezioni parassitarie. Un falso negativo, d'altra parte, può facilmente risultato se più grandi proteine non hanno sufficiente tempo per trasferire correttamente alla membrana. Improprio di macchiare ed elaborazione spesso producono distorta, sbiadito, o anche bande multiple, i risultati dei test che fa oggetto di interpretazione del tecnico.
Svantaggi: Costo elevato e richiesta tecnica
Il costo di un western blot è un composito dei grandi dispendii individuali per anticorpi contrassegnati, analisti qualificati e attrezzature di laboratorio. Un processo delicato, macchiarsi occidentale richiede precisione in ogni passo per la corretta identificazione dei costituenti di un campione. Un piccolo errore in concentrazione dei reagenti o in periodo di incubazione può essere disastroso per l'intero processo. Infine, le attrezzature necessarie per il rilevamento e la formazione immagine - chemiluminescente, fluorescente, radioattiva o sistemi di rilevamento laser..--possono essere troppo costosa per l'unità di microbiologia medio.