L'elettroforesi del gel dell'agarosi è una tecnica di laboratorio con cui le proteine sono separate da altro in base al formato. Un campione delle proteine miste, spesso segmenti di DNA o di molecole correlate, vengono inseriti a un'estremità di un foglio di gel di agarosio. Energia elettrica viene quindi applicato al gel e gli acidi nucleici negativamente caricati nelle proteine sono attratti dalla carica positiva a altra estremità del gel con le più piccole proteine spostare più lontano di quelle più grandi, formando una serie di bande di ogni dimensione di proteina.
Substrato
Gel di agarosio è un polisaccaride che forma una matrice di gelatina-come. Il gel fornisce un substrato sul quale DNA separazione può verificarsi. Frammenti di DNA più grandi richiedono più tempo per eseguire la migrazione attraverso le maglie della matrice. Questo fenomeno facilita la separazione di molecole di dimensioni.
Risoluzione
DNA che variano nel formato da coppie di basi a pochi fino a diversi milioni di paia base possa essere separato mediante elettroforesi su gel di agarosio. La concentrazione di agarosio utilizzato per rendere il gel determina la chiarezza della risoluzione delle particelle della proteina. Più piccole molecole di DNA vengono risolti più chiaramente quando una maggiore concentrazione di gel di agarosio viene utilizzata quando si esegue l'esempio.
Assorbimento di buffer
Al fine di applicare una carica elettrica per il campione di DNA, il gel di agarosio deve essere saturato con una soluzione tampone contenente sale. Due soluzioni popolari tampone TAE (Tris-acetato-EDTA) e TBE (Tris-Borato-EDTA). Buffer deve essere aggiunto ad una precisa concentrazione; un buffer eccessivamente diluito inibirà il movimento delle particelle della proteina e un buffer eccessivamente concentrato possa surriscaldarsi quando viene applicato l'elettricità e il calore in eccesso può sciogliere il gel o danneggiare le proteine.
Priorità bassa di contrasto della tintura
Coloranti fluorescenti quali il bromuro di etidio possono essere aggiunto ad un campione per visualizzare le proteine separate di DNA quando l'elettroforesi è completa. Questa tintura obbligazioni per gli spazi tra gli acidi nucleici del DNA. Il gel dell'agarosi fornisce un contrasto visivo con i coloranti in modo che la posizione di ciascuna banda della proteina possa essere chiaramente individuata.
Riferimento
Un campione di riferimento delle proteine di dimensioni note, indicato come una "scala", è spesso corrono parallelo il campione in questione. Poiché tutte le proteine della stessa dimensione e forma si muovono alla stessa velocità della stessa concentrazione di gel di agarosio, la posizione delle proteine scaletta in relazione il campione può essere utilizzata per determinare le dimensioni delle proteine in questione.
Acquisizione di proteina
Dopo che le proteine sono state separate, il gel dell'agarosi li mantiene in posizione quando l'elettricità è spenta. Ogni banda di proteine possa essere rimossi dal gel e trattato per ulteriori prove o sperimentazioni individualmente.