Biologi spesso bisogno di separare le proteine e acidi nucleici (DNA e RNA) in base alla dimensione o carica, utilizzando una tecnica chiamata elettroforesi del gel. In seguito, i biologi possono trasferire il campione dal gel ad una membrana per l'identificazione. Questo è noto come electroblotting.
Elettroforesi del gel
Nell'elettroforesi del gel, un campo elettrico provoca proteine o frammenti di DNA di viaggiare attraverso una lastra di gel. Più piccoli frammenti o proteine si muovono più rapidamente di quelle più grandi.
Una volta che le proteine o frammenti sono separati, biologi possono trasferirli ad una membrana e o macchia li, o anticorpi di uso per identificare proteine specifiche.
Electroblotting
Anche se il protocollo preciso varia, electroblotting in genere include i passaggi seguenti.
Dopo l'elettroforesi, i ricercatori hanno posto la lastra di gel in cima diversi fogli di carta da filtro e una spugna immersa in una soluzione tampone di trasferimento. Essi quindi posizionare una nitrocellulosa o membrana PVDF sopra il gel e coprire con carta da filtro più.
Applicando un campo elettrico provoca la caricate negativa frammenti o proteine per migrare verso l'alto dal gel alla membrana. A questo punto, i ricercatori possono rimuovere e la membrana della sonda.
Considerazioni
Quando stratificazione la membrana e il gel per electroblotting, è importante eliminare le bolle d'aria, come hanno potuto impedire la migrazione della proteine o acidi nucleici.
L'elettroforesi seguita da electroblotting è in genere preliminare al Western, Northern e Southern blotting, ognuno dei quali può identificare specifici frammenti di DNA/RNA o proteine.