Elettroforesi del gel è una delle più comuni procedure eseguite in laboratori di biologia molecolare e biochimica. Questa procedura richiede l'utilizzo di una soluzione tampone per essere eseguita correttamente. Saper preparare la soluzione tampone assicura un rifornimento pronto quando bisogno si pone.
Funzione
Elettroforesi del gel efficace richiede una soluzione tampone. Durante l'elettroforesi, la matrice di gel è immerso in una soluzione che permette di conduttività elettrica e mantiene il pH costante. La concentrazione della soluzione tampone svolge anche un ruolo critico nel tasso di migrazione delle molecole separate. Un'alta concentrazione di tampone causerà più veloce migrazione. Oltre a selezionare la concentrazione del buffer utilizzato durante la procedura di elettroforesi, il tipo di buffer utilizzato svolge anche un ruolo importante.
Tipi di buffer
Tris-acetato-EDTA (TAE) e tris-borato-EDTA (TBE) sono i due buffer che sono più comunemente usati durante l'elettroforesi del gel. Determinare quali buffer da utilizzare dipende da una varietà di fattori. TAE è molto efficace per la separazione dei frammenti più grandi di 4.000 paia di basi. Serve anche per separare il DNA Super-arrotolato.
TBE è più efficace per frammenti tra uno e 3000 coppie di basi di lunghezza. È anche la soluzione più efficace quando si utilizza la quantità di tensione superiore a 150 volt.
Preparazione di TAE
Preparare un brodo X 50 soluzione TAE comporta tre passaggi e quattro ingredienti. Per ogni litro di soluzione desiderata, mescolare 242 grammi della base di Tris con circa 600 ml di acqua deionizzata fino a completa dissoluzione. Aggiungere 57,1 millilitri di acido acetico glaciale e 100 millilitri di 0,5 molare EDTA, ph 8.0. Infine, aggiungere acqua deionizzata fino a quando il volume di soluzione finale raggiunge un litro. Archivio coperto strettamente a temperatura ambiente.
Preparazione di TBE
Per preparare un litro di 50 X stock soluzione TBE, 540 grammi di Tris base si combinano con circa 600 ml di acqua deionizzata e mescolare fino a scioglimento. Mescolare in 275 grammi di acido borico e 200 millilitri di 0,5 molare EDTA, ph 8.0. Aggiungere acqua deionizzata fino a quando il volume di soluzione totale raggiunge un litro. Autoclave per 20 minuti, quindi conservare ben chiuso a temperatura ambiente.
Diluizione e uso
Questi altamente concentrato Stock in soluzioni quindi possono essere diluiti a concentrazioni minori secondo le necessità di minori quantità di soluzioni di miscelazione con acqua deionizzata.