Cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) è un comune mezzo di analisi chimica strumentale. Una componente fondamentale di qualsiasi metodologia HPLC è il solvente particolare fase mobile utilizzato per sciogliere e trasportare le sostanze chimiche dell'analita. Molte fasi mobili vengono memorizzate nel buffer per controllare le variazioni di pH e garantire che il metodo di prova produce risultati accurati e precisi.
Buffer
Un buffer è una soluzione di solvente appositamente formulata che presenta soli piccole variazioni nel pH quando forti acidi o basi vengono aggiunti ad esso. Buffer vengono preparate sciogliendo una base debole e suo acido coniugato o un acido debole e la sua base coniugata in un solvente. Quando gli acidi o basi vengono aggiunti a un buffer, l'equilibrio acido - base già esistente nella soluzione automaticamente compensa l'aggiunta, con il risultato che c'è relativamente poco cambiamento del pH della soluzione.
Buffer e composti chimici ionizzabili
HPLC può essere utilizzato per analizzare i composti chimici ionizzabili. Si tratta di composti che possono formare prontamente gli ioni in soluzione, quali gli acidi carbossilici. In linea generale, tali composti dovrebbero essere analizzati nel loro stato non ionizzata, dove si esibiscono un comportamento coerente in termini di solubilità e interazioni con colonna HPLC materiali di imballaggio. Buffer di consentire il pH della fase mobile essere "bloccato" in un certo intervallo specifico dove le specie di interesse sono conosciuta per essere nel suo stato non ionizzata. Pure, buffer resistere locali variazioni di pH causato dai composti stessi.
Condizioni generali di utilizzo di Buffer
Buffer deve essere utilizzato ogni volta che una specie ionizzabile è l'analita. Questi includono acidi organici come l'acido sorbico e acido benzoico. Basi organiche contenenti gruppi funzionali ammina dovrebbero anche essere analizzati usando tampone fasi mobili. Sono esempi di tali basi organiche nicotina e metanfetamine. Fasi mobili memorizzato nel buffer possono essere utilizzati anche quando si analizzano i composti non ionizzabili per forzare i contaminanti in una loro forma ionizzata o non ionizzata, come richiesto per assicurare che non interferiscano con l'analisi delle specie di interesse.
Comune tampone fasi mobili
In generale, la costante di dissociazione acida, pKa, della specie tampone dovrebbe essere vicino al pH desiderato per il buffer. Pure, la fase mobile in genere dovrebbe essere almeno metà acqua per l'uso con specie inorganiche di bufferizzazione. Per bassi valori di pH in prossimità di 2 o 3, il più comune sistema di buffer consiste di sodio o di potassio sali dell'acido fosforico. Se è necessario un buffer di volatili, acetato o formiato può essere utilizzato. Un intervallo tipico per concentrazione di specie di buffer è da 10 a 50 millimoli per litro.