Passi nell'elettroforesi del Gel

Passi nell'elettroforesi del Gel

Elettroforesi del gel è un processo utilizzato per misurare il numero o la dimensione di DNA, RNA, geni e proteine. Il gel è la matrice in cui i campioni viaggiano attraverso e saranno separati in base alla loro dimensione. Piccole dimensioni si recheranno ulteriormente mentre molecole più grandi, più dense si recherà solo a breve distanza. Questa tecnica è spesso utilizzata come un primo passo in molti esperimenti genetici per garantire che il prodotto desiderato è presente.

Istruzioni

• Creare il gel di agar. Mescolare l'agar insieme acqua e sciogliere l'agar di riscaldamento. La quantità di agar e acqua necessarie saranno variano quindi assicuratevi di seguire ciò che è raccomandato sulla bottiglia di agar. Inserire il pettine di elettroforesi in gel di stampo. Il pettine crea i pozzi dove il campione è posto. Versare l'agar caldo nello stampo e l'agar raffreddare. Solidificherà quando fa freddo. Togliere il pettine di gel dallo stampo.

• Disegnare un diagramma piccolo del gel ed etichetta quale campione andrà in ciascun pozzetto. Questo è molto importante in quanto gel può contenere un sacco di pozzi e non si ricorda quale campione è stata caricata in ogni pozzetto. È necessario mantenere un record.

• Posizionare il gel freddo su una superficie scura come questo rende più semplice per caricare i campioni nel pozzo. Si consiglia di caricare solo i campioni in ogni altro bene come questo impedisce qualsiasi sovrapposizione o sanguinamento nel gel. Utilizzando una pipetta, mescolare ogni campione con una piccola quantità di colorante. La maggior parte del tempo questo colorante conterrà il bromuro di etidio, una sostanza tossica. Indossare guanti durante la miscelazione di campioni. Prestare attenzione quando si caricano i campioni nei pozzetti. Se si preme troppo lontano la punta della pipetta, andrà in gel che rovina il gel. Sarà necessario fare un nuovo gel in questo caso.

• Posto il gel con i campioni caricati nella camera di elettroforesi. Il lato con i campioni deve essere orientato in modo che siano più vicini al nero, o negativo, terminale.

• Mescolare una soluzione di sale utilizzando cloruro di sodio e acqua distillata. Versare questa soluzione salina in ogni lato della camera fino a quando il livello dell'acqua copre solo la parte superiore del gel. Si consiglia di versare la soluzione salina in primo luogo sui pozzi sui due lati contenente il gel. Quindi, versare la soluzione sul lato opposto del campione per coprire il gel. Questo riduce qualsiasi diffusione possibile campione durante il riempimento.

• Mettere il coperchio di elettroforesi sulla camera e collegare il filo rosso al terminale positivo della camera di scoppio e il cavo nero al terminale negativo. Accendere la fonte di energia, assicurando che la tensione è compresa tra 50 e 100 volt. Lasciare il gel per circa 10 minuti. Vedrete i campioni come corrono attraverso il gel di separazione.

• Attivare l'alimentazione e rimuovere il coperchio di elettroforesi. Rimuovere il gel e posizionarlo all'interno di un transilluminatore. Il transilluminatore è una scatola di luce ultravioletta. Scattare una foto del gel. Il bromuro di etidio darà fluorescenza e potete vedere le diverse bande di DNA. Stampare una foto del vostro gel se è possibile.