Per la maggior parte delle attività di laboratorio batterica, capsule di Petri sono indispensabili. Essi forniscono un contenitore sterile in cui archiviare gli elementi, ma solitamente sono usati per la coltivazione di colture. Le colture batteriche possono essere coltivate su medio-infuso agar in piastre di Petri, e colture cellulari possono essere coltivate in piastre di Petri con terreno di coltura in un'incubatrice. Come sono di solito usati per la coltivazione di colture batteriche, ti consigliamo di essere a conoscenza dei più comuni metodi e tecniche per l'utilizzo di batteri in capsule di Petri.
Piastre di versamento
Piastre per la crescita di colonie batteriche contengono agar, libbra di brodo (il mezzo di crescita) e un antibiotico fornendo selettività contro tutti i ceppi di batteri ad eccezione di quelli con immunità ad esso.
Versare piastre, brodo di autoclave LB e una concentrazione di peso-volume di 1,5% di agarosio. Ricordarsi di liquidi autoclave sul liquido cicli così essi non bollire. Una volta completato il ciclo di autoclave, agitare la soluzione per essere sicuri che l'agarosio è completamente mescolato. Una volta che il mix di LB-agar si è raffreddata a 140 gradi Fahrenheit, aggiungere l'antibiotico contro il quale i batteri di interesse ha una resistenza.
Versare il composto in capsule di Petri e lasciarli raffreddare su un ripiano con copertine. Dopo le piastre hanno raffreddato e indurito (che di solito ci vogliono un paio d'ore, ma possono essere lasciati fuori tutta la notte), conservare le piastre capovolte in frigo per evitare la condensa possa gocciolare sulla LB-agar. Conservare le piastre in un contenitore ermetico li aiuterà a mantenere per un periodo di tempo più lungo senza secchezza e screpolature.
Diffusione della cultura
Quando si lavora con le piastre, lasciarli capovolta nell'incubatrice per riscaldarsi prima di aggiungere la coltura batterica. Ricordatevi di etichetta le piastre secondo la resistenza agli antibiotico.
I batteri possono essere facilmente coltivati durante la notte in un incubatore d'agitazione in libbra di brodo. Una volta che questa cultura è nuvolosa, può essere trasferito su piastre di Petri per consentire queste cellule batteriche di formare le colonie. Per diffondere le colture batteriche su capsule di Petri, trasferimento tra. 5 ml e 1 ml di coltura batterica ad una piastra di agarosio pre-riscaldato. Aggiungere alcuni branelli di vetro sterile alla piastra, sostituire il coperchio e agitare la piastra così le perle di vetro spingono la cultura attraverso la superficie di agarosio. Consentire la cultura a riposare per circa 15 minuti, versare le perline e sostituire la piastra LB-agar upside-down in un incubatore durante la notte così le colonie possono crescere.
Isolamento di Colonia striature
A volte è importante essere in grado di isolare e far ricrescere una singola colonia batterica. Per effettuare questa operazione, utilizzare una punta di ciclo o pipetta sterile inoculazione e toccarlo per neanche una goccia di coltura batterica sulla piastra LB-agar o a una singola Colonia già crescendo sulla piastra. Con un rapido movimento avanti e indietro in un modello di zigzag, scarabocchiare la punta o ciclo leggermente attraverso una superficie fresca sulla piastra LB-agar. Girare la piastra lateralmente e ripetere il movimento di scribble, toccando solo la zona primaria scribble periodicamente. Questo creerà una striatura diluita nel caso in cui la densità delle colonie in crescita nella coltura batterica è elevata.
Colonie di picking
Per far crescere le colture batteriche liquide da singole colonie che crescono su piastre di LB-agar, scegli una Colonia utilizzando uno stuzzicadenti sterile o un puntale e toccare questo strumento per una singola Colonia. Cadere lo stuzzicadenti o la punta in una provetta contenente brodo LB pre-riscaldato e lasciare questo tubo in uno shaker incubato per tre-cinque ore.