Gradiente di saccarosio è una tecnica di centrifugazione utilizzata per separare le proteine di dimensioni diverse da un campione. Può essere utilizzato per isolare e purificare gli organelli delle cellule pure.
Attrezzature
Un swing-out ultracentrifuga e rotore, provette da centrifuga, pH-metro, peso di equilibrio, elettroforesi e western blot materiali sono necessari per separare le proteine tramite un gradiente di saccarosio.
Soluzioni
Soluzione tampone fosfato, soluzioni di saccarosio di concentrazione 15, 20, 25, 27.5, 30 e 35 per cento e acqua distillata sono richiesti per un gradiente di saccarosio.
Gradiente di saccarosio
Versare le soluzioni di saccarosio in una provetta da centrifuga singola, a partire con la più alta soluzione concentrata (35 per cento) e finendo con il più basso (5 per cento).
Tecnica di pipetta
Ogni soluzione di saccarosio deve essere consegnato tramite una pipetta sul lato della provetta da centrifuga. Il tubo deve essere verticale, e la pipetta deve essere tenuta ad un angolo. La soluzione dovrebbe scivolare giù per il tubo verso il basso. Lo strato inferiore sarà composta la soluzione del 35 per cento e lo strato superiore sarà composto dalla soluzione del 5 per cento.
Centrifugazione
Il campione è posto sopra il gradiente di saccarosio e il tubo viene inserito nel rotore. Nel rotore di fronte il campione viene inserito un secondo tubo di peso identico. Il tubo è filato ad alta velocità per diverse ore.
Analisi
Le frazioni vengono raccolti dal tubo ed analizzate tramite l'elettroforesi. Fasce distinte delle proteine sarà visibile.