Come trovare la concentrazione da assorbanza

Come trovare la concentrazione da assorbanza

Spettrofotometria è una tecnica di laboratorio comune per determinare la concentrazione del soluto in una soluzione. Uno spettrofotometro utilizza un prisma o un reticolo di diffrazione per selezionare la luce di una lunghezza d'onda desiderata e passare attraverso il campione. Un rivelatore su altro lato misura l'intensità della luce che lo colpisce. La misurazione dà la percentuale di trasmittanza e assorbanza quando lo strumento è calibrato correttamente. Dopo aver misurato l'assorbanza, trovare la concentrazione è un semplice calcolo che si basa su una formula chiamata legge di Beer.

Istruzioni

• Scrivere la seguente equazione: assorbanza = (assorbimento) (lunghezza) (concentrazione). Questa formula è chiamata legge di Beer. Sai l'assorbanza dal tuo esperimento, mentre la componente di lunghezza è la distanza attraverso la "provetta" - il contenitore utilizzato per contenere il campione nello spettrofotometro. Per la maggior parte delle cuvette la distanza è di 1 cm, anche se è necessario verificare. Infine, assorbività molare è una costante specifica per una data sostanza, il solvente e la lunghezza d'onda. Calcolare assorbività molare utilizzando l'assorbanza delle soluzioni standard misurato nel tuo esperimento.

• Immettere l'assorbanza e la concentrazione di almeno cinque campioni standard utilizzato nell'esperimento. Questi campioni standard hanno conosciuto la concentrazione, così è possibile utilizzarli per trovare l'assorbività molare. Saltare questo passaggio se si lavora con una molecola come il DNA cui assorbività molare a 260 nm è già noto. Per il DNA, è possibile utilizzare la calcolatrice sotto la sezione "Risorse" qui sotto.

• Utilizzare il programma di grafica per i dati di tabella con concentrazione sull'asse x e assorbanza sull'asse y del grafico. Derivare una retta di regressione per i dati utilizzando il programma; Questa equazione dovrebbe essere lineare. L'esatta procedura variano a seconda del programma di grafica che si utilizza; Se necessario, consultare la guida dell'utente per il programma di foglio di calcolo o la Guida in linea.

• Inserire l'equazione di linea-di-best-fit dal tuo grafico il valore di assorbanza per il tuo ignoto e risolvere per la concentrazione. Alternativamente, se hai a che fare con una molecola come il DNA cui assorbività molare una determinata lunghezza d'onda è già noto, è possibile inserire l'assorbanza nella formula di legge della birra che si è preso nota. Dividere assorbanza dalla lunghezza e dalla costante assorbività molare. Questa operazione vi darà la concentrazione in moli per litro.