In un Immunoassay la capacità di legare in un contenitore o in pozzetti di micropiastre è superiore rispetto alla quantità di proteina posizionata in contenitore o pozzi. Per ridurre o prevenire gli anticorpi o altri tipi di proteine e molecole di assorbire al contenitore o pozzi, il dosaggio deve essere lavato con buffer appropriato e deve essere aggiunto un reagente bloccante specifico. Il tipo di buffer e il Reagente Bloccante scelto dipende dal tipo di test sperimentali.
Istruzioni
• Rivestire i pozzetti della piastra con l'antigene. Utilizzare una diluizione di antigene. Soluzioni pure di antigene non sono necessari dal momento che solo circa il 3 per cento della proteina nel campione è la proteina dell'obiettivo. Quando si diluisce, garantire che i campioni contengono l'antigene ad una concentrazione che è all'interno della gamma di rilevazione dell'anticorpo. Dispensare la soluzione di diluizione di antigene giù i pozzetti della piastra. Alcuni piatti possono essere pre-rivestiti con l'antigene. Leggere le istruzioni fornite con i pozzetti della piastra.
• Coprire le piastre con un adesivo di plastica e incubare per una notte. Lavare le piastre con soluzioni tampone, come soluzione fisiologica tamponata o soluzione salina tamponata con fosfato. A lavare, sciacquare le piastre con una bottiglia squeeze riempita con la soluzione tampone sopra un lavandino di laboratorio. Pat le piastre con un tovagliolo di carta per rimuovere eventuali restanti gocce di soluzione tampone.
• Ridurre il legame non specifico di proteine e molecole mediante un blocco buffer o reagente, ad esempio un detersivo blocker, latte in polvere o siero bovino. Il tipo di reagente bloccante utilizzato dipenderà il dosaggio. Aggiungere il reagente bloccante ai pozzetti usando una pipetta. Coprire la piastra nuovo con adesivo di plastica e incubare per una notte.
• Ri-lavare i pozzetti della piastra nuovamente utilizzando una soluzione tampone. Questi passaggi diminuirà la quantità di legami non specifici che possono verificarsi per i pozzetti della piastra prima di aggiungere la soluzione di anticorpi necessari per la procedura. Inoltre, i reagenti blocchi possono contribuire a ridurre i colori di sfondo nei risultati delle analisi.