Gli anticorpi sono usati come reagenti immunologici studi quello proteine bersaglio e l'etichetta. Codifica un anticorpo con una molecola fluorescente e permettendo questo anticorpo associare agli antigeni di interesse, molecole possono essere localizzati attraverso un microscopio a fluorescenza. A volte gli anticorpi si legano antigeni o proteine non specifico a causa di siti dell'antigene altamente reattivo. Riduzione del legame non specifico anticorpo è fondamentale per la validità in immunologia risultati di macchiatura. Durante un'indiretta immunologia normale procedura di colorazione, si consiglia di inserire un passaggio tra le applicazioni di due anticorpi per ridurre il legame non specifico.
Istruzioni
• Mescolare il siero di capra con buffer normale risciacquo ad una concentrazione di siero di 2 per cento. Questa miscela funzionerà come un agente bloccante legandosi a qualsiasi non-specifici, reattivo, anticorpi endogeni.
• Applicare l'agente bloccante del siero di capra dopo aver erogato l'anticorpo primario dal campione.
• Lasciare l'agente bloccante sul campione per 1 ora a temperatura ambiente in un agitatore.
• Sfilare l'agente bloccante.
• Sciacquare il campione per 15 minuti tre volte utilizzando buffer risciacquo normale.
• Applicare l'anticorpo secondario.
• Completare la procedura di colorazione immunologica secondo il protocollo.