Cromatografia liquida ad alta pressione (HPLC) è uno strumento per la separazione di sostanze chimiche da una miscela. La separazione e l'identificazione di particolari sostanze chimiche all'interno di una miscela si verifica principalmente su colonna HPLC nel sistema. Molti tipi di colonne sono disponibili per sistemi HPLC e ciascun tipo è destinato a uno specifico tipo di analisi. La colonna C18 è il più forte non polari generalmente utilizzato. Dopo un uso continuo per un periodo prolungato di tempo, la portata del solvente attraverso la colonna diminuisce e si estende il tempo di analisi per un'analisi. Un'altra causa di rallentamenti di analisi sta avendo campioni lasciare piccole quantità prodotti chimici sul materiale colonna e riducendo la capacità della colonna per separare le sostanze chimiche. Rigenerazione della superficie colonna avviene trattando il materiale di imballaggio per una serie specifica di solventi per pulire eventuali campioni che rimangono nella colonna e rivitalizzano il materiale di supporto.
Istruzioni
• Scollegare la colonna C18 dal flusso di flusso e sostituire la colonna nella direzione inversa. In esecuzione sul retro solvente attraverso la colonna nella direzione opposta si allenterà l'effetto di imballaggio che si verifica nel corso del tempo. Cura deve essere presa per non perdere un sacco di materiale dalla fine della colonna di imballaggio. Alcuni produttori utilizzano una mesh più grande all'estremità a Monte della colonna, in modo che quando si inverte la direzione del flusso la maglia più grande è nella posizione a valle. Questo metodo di rigenerazione è definito backflush. Per proteggersi da materiale di imballaggio che scorre verso il rivelatore del sistema e causando una spina, consentono al sistema di eseguire senza il rivelatore collegato e diretto il deflusso della colonna da rifiuti.
• Posizionare il tubo di ingresso solvente in una serie di solventi per causare l'eluizione di eventuali composti mantenuti con la colonna in direzione inversa. La serie di solventi utilizzati variano nelle loro caratteristiche idrofile. Variando i solventi si saranno eluire composti di altrettanto variegata natura idrofila. Utilizzare successivamente 50 ml di ciascuno dei seguenti solventi: acqua (se si utilizza un buffer in vostro solvente), metanolo, isopropanolo, diclorometano, esano, diclorometano e isopropanolo.
• Ricollegare la colonna con l'orientamento corretto ed eseguire il solvente attraverso il sistema. Utilizzare almeno 75 ml di solvente per lavare la colonna prima di procedere. Eseguire un'iniezione di prova di uno standard che è stato eseguito quando la colonna era nuova e controllare i risultati. Prestare particolare attenzione ai tempi di ritenzione del picco, tailing di picchi e tempo totale di analisi. Il grado a cui questi attributi corrispondono con l'iniziale di eseguire per la colonna quando era nuovo indicherà il grado a cui la colonna è stata rigenerata. Se i risultati non sono soddisfacenti, sostituire la colonna con una nuova e la vecchia colonna di gettare nella spazzatura.