ELISA è l'acronimo di analisi dell'immunosorbente collegata di enzima, un metodo per studiare la presenza di proteine, peptidi o agenti infettivi, per esempio. È un metodo biochimico usato spesso nella ricerca e nella medicina per la diagnosi. Ci sono diverse versioni di Elisa: sandwich indiretto, diretto e competitivo, anche se tutte le versioni utilizzano piastre da 96 pozzetti, anticorpi diretti contro la molecola oggetto dell'indagine e una reazione colorimetrica determinare la presenza della molecola oggetto di studio. Questo cambiamento di colore può essere l'equivalente alla quantità della molecola studiata nei campioni di prova.
Istruzioni
• Determinare la molecola oggetto dell'indagine e i campioni richiesti di studiare questa molecola. Valutare la tecnica ELISA necessaria, questo dipenderà se la molecola studiata si attacca alla plastica della piastra ben 96, diretto, o richiede un anticorpo per catturare la molecola di interesse, indiretta. Determinare la sensibilità necessaria, ELISA sandwich è il più sensibile utilizzando la molecola oggetto di studio per essere inserita tra due anticorpi. Valutare la struttura della molecola, se la molecola oggetto di studio ha un sito di legame per gli anticorpi di una ELISA competitivo potrebbe essere più appropriata.
• Selezionare gli anticorpi adatti, sia monoclonali, derivati dal tipo di una cella e l'associazione a un sito della molecola studiata; o policlonali, derivata da diversi tipi di cellule e l'associazione a diversi siti sulla molecola studiata. Garantire gli anticorpi possono essere utilizzati in ELISA e funzioneranno nell'ELISA selezionato.
• Determinare il metodo di rilevazione, sia colorimetrico o fluorescenza. Analisi colorimetriche richiedono un enzima etichettato ad un anticorpo, mentre fluorescenza richiedono un fluorescene etichetta ad un anticorpo. Analisi colorimetriche utilizzano un enzima e un substrato che producono un cambiamento di colore. Il cambiamento di colore è uguale alla molecola oggetto di studio come il complesso di enzima-anticorpo è associato alla molecola oggetto di studio. Valutare i campioni esaminati come tessuti umani possono contenere enzimi utilizzati in analisi colorimetriche e interferire con i risultati.
• Ottimizzare tutte le diluizioni compresi i campioni e gli anticorpi in un tampone di bloccaggio. I campioni da testare devono contenere oltre il tre per cento della proteina bersaglio. Questo assicura che il target di interesse è a un livello che può essere rilevato. Ottimizzare l'incubazione degli anticorpi. Garantire che i controlli sono disponibili per la curva standard.