Se siete nuovi nel campo pratico della genetica, vi accorgerete che saper progettare un reverse primer è essenziale per quasi qualsiasi posizione nel campo. È un passo cruciale nella PCR (reazione a catena della polimerasi), che amplifica un gene specifico al fine di determinare la presenza e/o quantità. Sapendo come ottenere l'iniettore del oligonucleotide progettato, sarete un passo più vicino a conoscere il processo di analisi del gene applicata.
Istruzioni
• Inserisci la sequenza del gene di interesse in Primer-BLAST (Vedi risorse) per le specie appropriate e immettere i parametri come appropriato (ad es. Tm può variare secondo tornante loop e contenuto di GC).
• Fare clic su "Get primer" per utilizzare il motore di Primer-BLAST. Primer variabile può apparire se sono disponibili al tuo gene, e loro sequenze saranno elencate insieme alle loro proprietà.
• Scegliere il primer più adatto al tuo gene di interesse.
• Progettare il primer da vostra sequenza scelta. Questo sarà difficile per la maggior parte delle persone senza un background di chimica organica forte, quindi è meglio inviare una richiesta a un'azienda o un'istituzione che progetterà il vostro primer per voi. Se si desidera progettare da soli, vedere risorse per un protocollo stabilito.
Consigli & Avvertenze
- Essere sicuri che il primer è il complemento inverso di una sequenza genomica fuori il gene di interesse. In caso contrario, il vostro primer può temprare in modo improprio, o non a tutti, durante la PCR.
- TM dovrebbe essere preso in forte considerazione quanto può influenzare l'efficienza o anche il successo della PCR. Consultate risorse per una calcolatrice di Tm.
- Evitare ripetizioni che causano forcine o loop, come questo può portare a "dimeri dell'iniettore," dove primer tempri a se stessi e contaminare la vostra miscela PCR.
- Garantire che il vostro primer in avanti non sarà tempri il vostro primer inverso.