Come preparare una goccia di sospensione

Per determinare la struttura 3D di una proteina, è necessario innanzitutto un cristallo puro di esso. Il metodo di goccia di attaccatura utilizza una goccia di proteine contenenti soluzione appeso da un vetrino coprioggetti. Sotto questa sospensione goccia si trova un serbatoio con una concentrazione salina maggiore di quella della goccia. Nel corso del tempo, del vapore acqueo lascia la goccia e finisce nel serbatoio, causando la proteina a cristallizzare. Ogni proteina richiede condizioni diverse (ad esempio la concentrazione di sale e pH), e spesso prova ed errore offre l'unico modo per trovare le giuste condizioni.

Istruzioni

• Mettere sull'ingranaggio di laboratorio (cappotto, guanti e occhio protezione).

• Utilizzare una micropipetta per aggiungere 1,1 mL di soluzione tampone acetato e cloruro di sodio (sale) in una provetta Eppendorf.

• Centrifugare la provetta Eppendorf chiusa con la soluzione salina all'interno di esso per circa cinque minuti a 13.000 rpm. Ricordare di bilanciare la centrifuga inserendo un'altra provetta Eppendorf contenente 1,1 mL d'acqua davanti e di fronte al tubo di soluzione salina.

• Aggiungere 1 mL di soluzione salina in un pozzetto di una piastra a 24 pozzetti.

• Utilizzare una siringa riempita di grasso per porre un sottile strato di grasso intorno al bordo di questo bene. Fare attenzione a non per aggiungere troppo o troppo poco. Se si aggiunge troppo grasso, il grasso sarà correre giù nel pozzo e possibilmente rovinare il tuo esperimento. Se si utilizza troppo poco, il pozzo non sarà chiuso ermeticamente e l'esperimento non funzionerà. Obiettivo per appena abbastanza grasso che il vetrino coprioggetto e grasso formano una chiusura ermetica più tardi.

• Roll l'argilla con le mani per fare quattro piccole palline e li avvicinare ai quattro angoli della piastra 24 pozzetti. Si comporteranno come supporti la copertura della piastra non venga a contatto con il vetrino coprioggetti.

• Utilizzare aria compressa per soffiare qualsiasi polvere fuori il vetrino coprioggetti. Tenere il coprioggetto con un paio di pinzette pulite.

• Aspirare 4 microlitri della soluzione di lisozima con la micropipetta e aggiungere questa soluzione al centro del coprivetrino. Cambiare i puntali per pipette e aggiungere 4 microlitri di soluzione salina. Una pipetta delicatamente su e giù, succhiare nel liquido e poi espellerla, per mescolare la soluzione salina con la soluzione di lisozima. Fare attenzione a mescolare le due senza disperdere il fluido in tutto il vetrino coprioggetti.

• Trasformare il coprioggetto più rapidamente in modo fluido non sfilare e piantarlo ad angolo retto in cima al pozzo. Prendersi cura di premere delicatamente su di esso in modo che forma una chiusura ermetica con il grasso tutto intorno ai bordi del pozzo.

• Spingere il coperchio della piastra 24 pozzetti le palline di argilla e lasciare il piatto in un luogo fresco.