Dal 1880, il test di macchia di grammo rimane un importante metodo di identificazione batterica e classificazione. Microbiologi eseguono spesso il test di Gram come il primo passo nell'identificazione di particolari tipi di asta-a forma di batteri del genere Bacillus. Colorazione di Gram è denominato per il suo inventore, batteriologo danese Hans Christian Gram. La tecnica funziona a causa di una differenza in gram-positivi e gram negativi parete cellulare batterica fisiologia. Alcuni coni retinici gram-positivi causano gravi malattie come l'antrace e il tetano.
Istruzioni
• Assicurare l'uso di uno spazio pulito, asettico laboratorio per condurre il test di macchia di grammo. Indossare rivestimenti di abbigliamento e calzature di laboratorio pulito per evitare la contaminazione. Utilizzare una maschera e guanti durante la manipolazione di colture batteriche. Isolare una colonia di bacilli per il test e crescono fuori su agar nutriente in capsule di Petri. Sterilizzare le piastre di Petri e agar con una pentola a pressione prima di utilizzare.
• Aggiungere poche gocce di acqua pulita alla piastra di coltura. Distribuirlo uniformemente sopra l'agar. Trascinare un ciclo di inoculazione leggermente sulla superficie dell'agar. Trasferire il campione su un vetrino pulito e spalmarla uniformemente in area circolare le dimensioni di una monetina. Mantenere la dimensione del campione minimo; si dovrebbe essere a malapena in grado di vederlo con l'occhio nudo.
• Applicare il 95% metanolo sopra lo striscio di diapositiva per due minuti per fissare le cellule e prevenire la distorsione della loro morfologia. Aria asciugare il vetrino o riscaldarlo delicatamente su una fiamma bassa bruciatore di Bunsen. Spostare il cursore avanti e indietro calore in modo uniforme ed evitare localizzata hot spot. Applicare il calore in modo uniforme e coerente. Evitare di assumere la diapositiva fuori la fiamma fino a quando hai finito di riscaldarla.
• Versare cristalvioletto macchia reagente sopra il vetrino fisso. Lasciate riposare per 30-60 secondi. Lavare la macchia con acqua del rubinetto per pochi secondi. Scolare l'acqua in eccesso dalla diapositiva. Coprire il vetrino con il reagente di macchia di iodio per 30 a 60 secondi. Lavare via lo iodio con acqua del rubinetto. Inclinare la diapositiva e aggiungere poche gocce di decolorante. Applicare fino a quando il deflusso è pulito. Lavare il vetrino.
• Immergere il vetrino con safranina colore rosa Counter-colorazione reagente per 30 secondi. Puoi sostituirlo con soluzione di Fucsina basica per la safranina. Lavare delicatamente il vetrino e agitare di acqua in eccesso. Asciugare asciugare con carta assorbente e poi asciugare il vetrino. Esaminare il vetrino preparato sotto un microscopio equipaggiato con una sorgente di luce. Cercare e identificare i coni retinici gram positivo batteri con colorazione blu o viola della prova di macchia di grammo.