Materia organica vegetale è costituito da molte cellule, ciascuna delle quali contengono il DNA che contiene le istruzioni per la crescita e la funzione. Gli scienziati possono desiderano studiare tutto o parte del materiale genetico presente nelle cellule e quindi necessario tranquillamente estrarre il DNA dal materiale strutturale e macchinario cellulare che lo circonda.
Istruzioni
• Riempire il bagnomaria al livello consigliato con acqua, che varia con le specifiche di ogni produttore, e accenderlo. Impostare il bagnomaria a 65 gradi Celsius e lasciarlo a venire fino alla temperatura. Posizionare il contenitore di isopropanolo sul ghiaccio. Impostare la centrifuga a 3.000 giri al minuto ad una temperatura di 20 gradi Celsius.
• 2 g di foglie su un equilibrio di pesare e inserirli in un mortaio. Così il prodotto finale è costituito da uno o due per cento del beta-mercaptoetanolo, aggiungere abbastanza beta-mercaptoetanolo tramite pipetta a un contenitore di tampone di estrazione. Ad esempio, se si dispone di un volume di tampone che misura circa 100ml, quindi aggiungere 2 ml beta-mercaptoetanolo al contenitore e mescolare accuratamente.
• Tampone di estrazione di 7 ml di pipetta nel mortaio. Schiacciare la miscela in un liquido omogeneo con il pestello.
• Piegare un pezzo di garza sopra per formare quattro strati. Filtrare e spremere il liquido attraverso gli strati in una provetta da centrifuga 15 ml.
• Porre la provetta nel bagnomaria per 30to 60 min utes. Agitare la provetta per mescolare il contenuto ogni quarto d'ora. Lasciare il tubo raffreddare a temperatura ambiente dopo il periodo di tempo pieno.
• Riempire il tubo con la miscela di cloroformio e isoamylalcohol (questo contiene 24 pezzi cloroformio per una parte isoamylalcohol), quindi il tubo contiene approssimativamente metà del campione e mezza la nuova aggiunta di liquida. Richiudere la provetta e girare sottosopra un paio di volte lentamente così mescola il fluido.
• Inserire il tubo nella centrifuga e lasciarlo girare per 10 minuti.
• Mettere 50 ml RNasi A in una nuova provetta da centrifuga. Pipettare il surnatante (lo strato chiaro nella parte superiore del tubo sopra uno strato bianco di detriti) nel primo tubo fuori e spostarlo il secondo tubo. Tappare il tubo e invertire un paio di volte per mescolare il contenuto. Tenere il tubo a temperatura ambiente per un'ora.
• Eseguire i passaggi 6 e 7 di nuovo due volte e quindi si ha un tubo chiaro esempio. Pipettare quindi fino a 9 ml di liquido limpido dal tubo finale in un nuovo tubo. Aggiungere 6 ml isopropanolo e invertire i tubi 10 volte in modo gentile così il DNA cade dalla soluzione e in forma solida. Poi Centrifugare la provetta per 10 minuti, che dovrebbe creare un pellet di DNA nella parte inferiore del tubo.
• Versare il liquido nel tubo così il pellet rimane. Pipetta in 2 ml di etanolo al 70% e posto indietro nella centrifuga per cinque minuti. Versare nuovamente la parte liquida. Utilizzare una pipetta sterile per prendere il pellet e spostarlo in una sterile provetta Eppendorf da 1,5 ml. Pipettare in 200 microlitri di acqua deionizzata sterile e lasciare che il DNA si dissolvono completamente nel liquido, che può richiedere una notte. Il campione è quindi pronto per l'analisi.