Come analizzare l'elettroforesi del Gel

Come analizzare l'elettroforesi del Gel

L'elettroforesi è il movimento delle molecole basato sulla carica elettrica. Sfruttando la porosità del gel dell'agarosi e il fatto che il DNA ha una spina dorsale di fosfato negativamente caricato, gli scienziati possono separare frammenti di DNA di dimensioni su un gel di agarosio applicando una corrente ad esso. Diverse dimensioni dei frammenti eseguito a velocità diverse; piccoli frammenti muovono più velocemente attraverso il gel più grandi frammenti. Per determinare le dimensioni di una molecola tramite la separazione di esso da altri frammenti molecolari aiuta gli scienziati a genetica e proteomica esperimenti.

Istruzioni

• Mettere i guanti di nitrile.

• Trasferire con cautela il gel di agarosio dalla vaschetta del gel alla casella di sorgente di luce UV. Gel di agarosio possono strappare o rompere, così quando si trasferisce il gel, trasferirlo su un oggetto solido, piatto come un foglio di plastica dura.

• Mettere gli occhiali UV-prova.

• Accendere la sorgente di luce UV.

• Scattare una foto del gel con la fotocamera.

• Stampa la foto.

• Annotare le dimensioni note delle bande frammento nel vicolo scala basato sulla chiave dalla scala che è stato utilizzato direttamente sulla foto.

• Determinare la dimensione relativa delle bande nei vicoli del campione.

• Confrontare la dimensione di banda prevista con la dimensione di banda misurata. Se corrisponde, la reazione a catena della polimerasi (PCR) o la reazione enzimatica lavorato. In caso contrario, verificare il primer o plasmidi una seconda volta e confermare la dimensione prevista. Se la band è ancora un mistero e si ripete, considerare l'invio di quel pezzo di gel ad un impianto di sequenziamento del DNA per l'analisi.

Consigli & Avvertenze

  • C'è spesso una band composta da primer nella parte inferiore delle corsie su un gel di elettroforesi bromuro di etidio. Questa non è una band di DNA replicata e può essere ignorata.
  • Esecuzione di gel più lento tende a dare bande più puliti. Per effettuare questa operazione, è necessario ridurre la corrente nella finestra di gel. Se i risultati del gel devono essere pubblicati, è possibile eseguire il gel a una bassissima corrente durante la notte.
  • Quando si maneggia gel contenente bromuro di etidio, indossare sempre i guanti di nitrile. Il bromuro di etidio è una molecola molto piccola e può passare attraverso il lattice.
  • Non usare mai candeggina per pulire un'area che è stata contaminata con il bromuro di etidio. Candeggina reagisce con bromuro di etidio e produce prodotti di reazione estremamente pericolose.
  • Leggere il foglio di dati materiale di sicurezza (MSDS) per il bromuro di etidio prima di lavorare con esso.